Экстракция антигенов из рака молочной железы. Углеводы антигенов рака молочной железы

Экстракция антигенов из рака молочной железы. Углеводы антигенов рака молочной железы

Ввиду низкого выхода антигенного препарата нами в дальнейшем особое внимание было уделено полноте экстракции антигенов из ткани. Были изучены несколько вариантов водно-солевой экстракции (способ II), обоеначаемые ниже символами А, Б, В и Г. Оказалось, что при использовании водно-солевой экстракции удается значительно увеличить выход препарата — до 0,5%, а из некоторых образцов ткани — до 1,5% от веса исходной высушенной ткани. Существенной разницы в количестве получаемого антигенного комплекса при использовании вариантов А, Б и В не было. При экстракции 3 М КCl (способ II Г) выход препарата был несколько выше. Кроме того, было отмечено, что для достижения максимального выхода антигенного комплекса необходимы повторные экстракции.

Выход антигенного препарата в значительной мере зависел также от размера исходной опухоли. Большие выходы антигенного препарата нами были получены из опухолей большего размера.
Таким образом, сопоставление двух методов экстракции показало, что водно-солевое извлечение дает более высокий выход целевого материала.

Препараты, полученные способами I и II, обладали антигенной активностью, что было доказано получением с их помощью иммунных сывороток. Путем постановки реакции преципитации в геле методом двойной диффузии по Оухтерлони установлено, что антисыворотка к антигенному комплексу, выделенному по способу, реагирует только с антигенами из опухоли молочной железы и не реагирует с антигенами из нормальной ткани молочной железы и некоторых нормальных органов. Эти данные дают основание полагать, что в иммунной сыворотке находятся антитела к антигенному комплексу, находящемуся в опухолевой ткани и отсутствующему в тканях нормальных органов. Такие же результаты получены и при испытании антигенного комплекса, полученного способом II. Антисыворотка реагировала только с антигенами из раковой опухоли молочной железы и не реагировала с антигенами из нормальных тканей. В то же время обе сыворотки давали четкую линию преципитации с антигенами, полученными как по способу А, так и по способу В.

Дальнейший анализ антигенных комплексов I и II позволил установить, что оба они содержат до 20—40% белка и 60—80% углеводов. Наличие нуклеиновых кислот спектрофотометрически выявить не удалось.

По данным газожидкостной хроматографии, в антигенном комплексе присутствуют фукоза, галактоза, глюкоза, манноза, N-ацетилглюкозамин, N-ацетилгалактозамин и сиаловые кислоты. Наличие сиаловых кислот подтверждено также с помощью метода Уоренна. Содержание Сахаров, как и содержание белка в антигенных препаратах, зависело от размеров опухолей. Как правило, в препаратах, выделенных из опухолей малых размеров, содержание сахаров было меньшим.

По данным электрофореза в полиакриламидном геле, в суммарных антигенных комплексах, полученных разными способами, обнаруживаются высокомолекулярные соединения, прокрашивающиеся как реактивом Шиффа на углеводы, так и кумасси на белок. Прокрашивание кумасси позволило выявить в суммарном антигенном комплексе не менее 9 зон, электрофоретическая подвижность которых отвечает веществам с молекулярным весом от 10 000 до 150 000 дальтон.

В результате гель-хроматографии антигенного комплекса на сефарозе 4В были получены две основные фракции — А и Б. Фракция А, по данным электрофореза в полиакриламидном геле, представляет собой высокомолекулярные соединения, обнаруживающиеся реактивом Шиффа на углеводы и не дающие реакции на белок с кумасси. Определение белка по методу Лоури также показывает отсутствие заметных количеств белка. После метанолиза по фракции А с помощью ГЖХ обнаружено высокое содержание глюкозы; остальные моносахариды, обнаруженные в суммарном комплексе, присутствуют лишь в следовых количествах. Во фракции Б, по данным электрофореза в полиакриламидном геле, обнаруживается серия зон, окрашивающихся как реактивом Шиффа, так и кумасси. Содержание белка во фракции Б, определенное по методу Лоури, составляет около 40%. С помощью ГЖХ во фракции Б обнаружены фукоза, галактоза, манноза, N-ацетилглюкозамин, N-ацетилгалактозамин и сиаловые кислоты примерно в таком же отношении, что и в исходном антигенном комплексе, из которого фракция Б выделялась.
В реакции преципитации в геле методом двойной диффузии по Оухтерлони с соответствующей антисывороткой реагировала только фракция Б.

Из приведенных данных можно сделать вывод, что антигены, выделяемые из опухоли молочной железы, имеют гликопротеиновую природу. Это подтверждается тем, что после обработки суммарного антигенного комплекса проназой его антигенная активность утрачивается полностью, что характерно также и для раково-эмбрионального антигена. Это обстоятельство позволяет предположить, что полипептидная составляющая антигенов играет существенную роль в проявлении их антигенных свойств.

С целью выяснения роли углеводной составляющей антигенов нами проведено десиалирование суммарного антигенного комплекса. Полученный в результате препарат практически не отличался по антигенной активности от исходного комплекса в реакции преципитации в геле по Оухтерлон и в реакции микропреципитации по Уанье. В то же время испытание десиалироваппого антигенного комплекса в кожной реакции замедленной гиперчувствительности выявило снижение его иммунологической активности почти в два раза. Очевидно, что в проявлении иммунологической активности в реакциях in vivo углеводная составляющая играет определенную роль.

- Читать далее "Гликопротеины рака молочной железы. Антигенный комплекс эмбриональной ткани"

Оглавление темы "Антигены и антитела при раке":