ДНК-диагностика атаксии Фридрейха

Многолетний (с 1995 г.) опыт проведения ДНК-диагностики атаксии Фридрейха в различных клиниках мира позволил сформулировать критерии отбора больных, подлежащих прямому ДНК-тестированию на предмет выявления мутаций в гене FRDA (Иллариошкин С.Н. и др., Forrest S. et al., De Silva R. et al., Zouari M. et al.). Согласно современным представлениям, исследование гена FRDA показано:
• во всех случаях ранних идиопатических атаксий, если причина болезни не ясна и не может быть исключен аутосомно-рецессивный тип наследования;
• в случаях атаксий дегенеративной природы с четким аутосомно-рецессивным наследованием — независимо от возраста дебюта заболевания;
• в случаях спорадических атаксий дегенеративной природы (независимо от возраста) — при наличии в клинической картине хотя бы отдельных симптомов, обычно свойственных атаксии Фридрейха (например, кардиомиопатии, нарушений глубокой чувствительности).

Такой подход к ДНК-тестированию позволяет с достаточно высокой вероятностью гарантировать своевременную адекватную молекулярную диагностику болезни не только при ее «классическом» варианте, но и в случае развития тех или иных атипичных клинических вариантов атаксии Фридрейха.

Идентификация специфического генетического дефекта при атаксии Фридрейха сделала возможным проведение прямой ДНК-диагностики данного заболевания. Такая диагностика предполагает непосредственное обнаружение экспансии тринуклеотидных GAA-повторов в соответствующем участке гена FRDA, она не требует исследования ДНК других членов семьи и может применяться как на развернутой стадии болезни, так и с целью ранней доклинической или пренатальной диагностики носительства мутации.

Прямая ДНК-диагностика атаксии Фридрейха основана на полимеразной цепной реакции (ПЦР), в которой осуществляется амплификация GAA-тринуклеотидного участка 1-го интрона гена FRDA. При электрофорезе продуктов амплификации мутантные аллели определяются как фрагменты ДНК увеличенной длины, нередко в виде смазанного пятна (последнее обусловлено соматическим мозаицизмом мутантного GAA-повтора и особенностями амплификации сверхдлинных тринуклеотидсодержащих аллелей).

ДНК-диагностика атаксии Фридрейха
Клинико-генетический анализ семьи Аг.-Сеид. с атипичной картиной атаксии Фридрейха:
б - результаты прямой ДНК-диагностики.

В типичных случаях у больных отсутствуют аллели нормальной длины. Стандартная электрофореграмма с результатами прямой ДНК-диагностики атаксии Фридрейха на основе исследования гена FRDA показана на рисунке.

Эффективность амплификации мутантных аллелей значительно снижается по мере нарастания числа GAA-триплетов, поэтому аллели с наибольшей степенью экспансии повторов (свыше 1000 копий) на электрофореграмме могут отчетливо не визуализироваться. У таких больных для прямой ДНК-диагностики применяется более трудоемкий метод блот-гибридизации (Durr A. et al.).

Некоторые лаборатории предпочитают использовать блот-гибридизацию для рутинной ДНК-диагностики атаксии Фридрейха. В редких случаях, когда больной является компаунд-гетерозиготой по экспансии GAA-повторов в одном аллеле и точковой мутации в другом аллеле гена, на электрофореграмме будут видны 2 продукта амплификации - увеличенной (экспансия повторов) и нормальной длины.

В такой ситуации сам по себе факт обнаружения одного патологически удлиненного аллеля при наличии соответствующей клинической картины позволяет с высокой вероятностью склониться в пользу диагноза атаксии Фридрейха.

Однако окончательное подтверждение возможно только после выявления точковой мутации на второй хромосоме, которое проводится с помощью стандартных подходов мутационного скрининга (чаще всего используется SSCP-анализ и прямое ссквенирование кодирующей области гена).

- Читать "Принципы лечения атаксии Фридрейха и ее эффективность"

Оглавление темы "Атаксия Фридрейха":
  1. Пример атипичной формы атаксии Фридрейха
  2. Пример атипичной формы атаксии Фридрейха варианта FARR
  3. Пример атаксии Фридрейха фенотипа спастической атаксии
  4. Пример мягкой формы атаксии Фридрейха - акадской формы
  5. Морфология атаксии Фридрейха
  6. Дополнительные методы обследования при атаксии Фридрейха
  7. Дифференциальная диагностика атаксии Фридрейха
  8. ДНК-диагностика атаксии Фридрейха
  9. Принципы лечения атаксии Фридрейха и ее эффективность
  10. Профилактика и скрининг на атаксию Фридрейха

Ждем ваших вопросов и рекомендаций: