Радиолиганд и бициклофосфат. Радиолигандный анализ ГАМК рецепторов

Возможность ингибирования специфического связывания радиолиганда бициклофосфатом в следовых концентрациях подтверждается следующим экспериментом. Мембраны предварительно инкубировали с t-БЦФ (100 нМ) и пикротоксином (10000 нМ). В дальнейшем пробы подвергали 2-х-, 3-х-, 4-х- и 5-кратному отмыванию - центрифугированию. Плотность хлор-ионных каналов оценивали методом радиолигандного анализа.

Видно, что для проб, подвергнутых предобработке бициклофосфатом в концентрации 100 нМ, недостаточно 4-х-кратного отмывания. В этих условиях в инкубационной среде выявляются следы ГАМК-литика, что подтверждается торможением специфического связывания Н-ТВОВ (на 9 %). Сходные данные получены и при предварительной обработке мембран пикротоксином.

Как известно, анализ данных радиолигандного анализа в координатах Лайнуивера-Бэрка позволяет оценить характер взаимодействия антагониста с белком рецептора. С этой целью инкубировали синаптические мембраны коры больших полушарий крыс с норборнаном (10, 100 и 1000 нМ) или ДСТА (100, 1000, 10000 нМ) в присутствии 3Н-ТВОВ. Концентрации радиолиганда составляли 1,0; 2,5 и 5,0 нМ.

Анализ результатов показывает, что ДСТА проявлял свойства конкурентного антагониста 3Н-ТВОВ, в то время как норборнан ингибировал связывание лиганда неконкурентно. Эти данные в сопоставлении с высоким сродством норборнана к белку хлор-ионофора (IC50=46 нМ, см. выше) позволяют высказать предположение, что указанный яд необратимо ингибирует хлор-ионные каналы ГАМКа рецепторов.

бициклофосфат

Считается, что способность ацилирующих лигандов конкурировать за места специфического связывания значительно выше при низких концентрациях мембранного белка. И наоборот, повышение в инкубационной среде содержания белка мембран снижает сродство рецептора-мишени к яду. Предполагается, что причиной этого явления могут быть конформационные изменения рецепторного комплекса после присоединения ацилирующего агента. Для обнаружения указанного феномена определяли ICso норборнана и ДСТА в отношении специфического связывания 3Н-ТВОВ при различных концентрациях белка мембран целого мозга крыс (исключая мозжечок).

Как следует из полученных результатов, повышение содержания белка в инкубационной среде приводит к снижению сродства норборнана к хлор-ионофору, что выражается в увеличении значении IC50. В этих условиях достоверных изменении ICso, полученной с использованием ДСТА, не выявлено. Приведенные результаты также свидетельствуют о необратимом угнетении норборнаном хлор-ионных каналов ГАМКа рецепторов.

В опытах in vitro изучали влияние предварительной инкубации синаптических мембран с норборнаном (концентрация - 100 нМ, 30 мин при 0°С) на специфическое связывание 3Н-ГАМК, 3Н-мусцимола, 3Н-диазепама и 3H-QNB. Препараты мембран подвергали 5-кратному отмыванию - центрифугированию и осуществляли РЛА с перечисленными радиопрепаратами.

Предварительная инкубация мембран коры больших полушарий крыс с норборнаном не влияла на свойства ГАМКа-, бензодиазепиновых и мускариновых рецепторов. Это соответствует предыдущим результатам (см. выше) об отсутствии изменении связывания 3Н-ГАМК, 3Н-мусцимола, 3Н-диазепама и 3H-QNB (все лиганды использовались в фиксированной концентрации) в присутствии норборнана (диапазон концентрации - 10-9-10-4 М).

- Читать далее "Гетерогенность хлорионофоров. Влияние норборнана на хлор-ионофоры"

Оглавление темы "ГАМК литики":
1. Пикротоксин. Эффекты и свойства пикротоксина
2. 2,6,7-Триоксабициклооктаны. Метаболизм триоксабициклооктаны
3. Эффекты триоксабициклооктана. Молекулярный механизм активности антагонистов ионофора
4. Лигандов хлор-ионофора. Норборнан
5. Эффекты норборнана. Физиология норборнана
6. Агонисты ГАМКа рецепторов. Судорожные эффекты норборнана
7. ГАМК-литики. Блокирование хлор-ионофора
8. Радиолиганд и бициклофосфат. Радиолигандный анализ ГАМК рецепторов
9. Гетерогенность хлорионофоров. Влияние норборнана на хлор-ионофоры
10. Интоксикация ГАМК-литиками. Отравление ГАМК-литиками

Ждем ваших вопросов и рекомендаций: