Методы определения активности ферментов
В последние годы получают развитие методы, основанные на непосредственном определении активности ферментов в клетках крови, культуре тканей и т. д. Для определения активности галактозо-1-фосфат-уридилтрансферазы (проба на галактоземию) Beulter и Baluda в 1966 году предложили флюорометрический тест, в основе которого лежит реакция восстановления НАДФ, обладающего в восстановленной форме сильной флюоресценцией.
В последующем тест Бойтлера был развит и использован для экспресс-определения глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы, пируваткиназы, глутаматдегидрогеназы и других ферментов. Murphey и соавт. модифицировали тест Бойтлера, благодаря чему ферментативный скрининг стал возможен для выявления аргининосукцинатацидурии и недостаточности a1-антритрипсина.
Метод Бойтлера и его модификации имеют два принципиально важных преимущества при использовании в массовом скрининге: активность ферментов определяется в капле крови, высушенной на фильтровальной бумаге. Кроме того, в крови, полученной с бумажного диска, методом гелевого электрофореза может быть исследован спектр изоферментов.
К сожалению, многие другие ферменты методом Бойтлера определить не представляется возможным, так как они не содержатся в клетках крови, а определение ферментативной активности в биопсийном материале (печень, почки, мышцы и др.) возможно лишь при обследовании в условиях специализированного стационара.
В последнее время предложен микробиологический метод определения активности ферментов в каплях крови, высушенной на фильтровальной бумаге (enzyme auxotroph test).
Принцип этого метода состоит в том, что специальные, так называемые ауксотрофные, мутанты микробов растут на среде лишь в том случае, если под действием ферментов крови в среде образуется необходимый для роста микроорганизмов компонент. Так, ауксотроф УР-3 В. subtilis растет исключительно при наличии аргинина в культуралыюй среде, но не может расти в среде, содержащей аргининоянтарную кислоту.
Если в капле крови, внесенной в эту среду, имеется фермент аргининосукцинатлиаза, то в результате расщепления аргининоянтарной кислоты образуется свободный аргинин, и рост микробов в таких случаях указывает па наличие соответствующей ферментативной активности.
- Рекомендуем далее ознакомиться со статьей "Целесообразность скрининга нарушений обмена веществ у детей"
- Вернуться в оглавление раздела "генетика"
Оглавление темы "Болезни обмена веществ у детей":- Вторичные поражения соединительной ткани - причины рахитоподобных поражений
- Соединительная ткань при почечно-тубулярном ацидозе (ПТА) у детей - клиника
- Витамин D-резистентный рахит (фосфат-диабет) у детей - причины, клиника
- Соединительная ткань при болезни де Тони-Дебре—Фанкони у детей
- Анализы для диагностики болезней соединительной ткани у детей
- Проблемы диагностики нарушений обмена веществ у детей
- Пренатальная диагностика нарушений обмена веществ у детей
- Скрининг нарушений обмена веществ у детей
- Скрининг-программы нарушений обмена веществ у детей
- Методы определения активности ферментов