Методы определения активности ферментов

В последние годы получают развитие методы, основанные на непосредственном определении активности ферментов в клетках крови, культуре тканей и т. д. Для определения активности галактозо-1-фосфат-уридилтрансферазы (проба на галактоземию) Beulter и Baluda в 1966 году предложили флюорометрический тест, в основе которого лежит реакция восстановления НАДФ, обладающего в восстановленной форме сильной флюоресценцией.

В последующем тест Бойтлера был развит и использован для экспресс-определения глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы, пируваткиназы, глутаматдегидрогеназы и других ферментов. Murphey и соавт. модифицировали тест Бойтлера, благодаря чему ферментативный скрининг стал возможен для выявления аргининосукцинатацидурии и недостаточности a1-антритрипсина.

Метод Бойтлера и его модификации имеют два принципиально важных преимущества при использовании в массовом скрининге: активность ферментов определяется в капле крови, высушенной на фильтровальной бумаге. Кроме того, в крови, полученной с бумажного диска, методом гелевого электрофореза может быть исследован спектр изоферментов.

К сожалению, многие другие ферменты методом Бойтлера определить не представляется возможным, так как они не содержатся в клетках крови, а определение ферментативной активности в биопсийном материале (печень, почки, мышцы и др.) возможно лишь при обследовании в условиях специализированного стационара.

Тесты определения активности ферментов

В последнее время предложен микробиологический метод определения активности ферментов в каплях крови, высушенной на фильтровальной бумаге (enzyme auxotroph test).

Принцип этого метода состоит в том, что специальные, так называемые ауксотрофные, мутанты микробов растут на среде лишь в том случае, если под действием ферментов крови в среде образуется необходимый для роста микроорганизмов компонент. Так, ауксотроф УР-3 В. subtilis растет исключительно при наличии аргинина в культуралыюй среде, но не может расти в среде, содержащей аргининоянтарную кислоту.

Если в капле крови, внесенной в эту среду, имеется фермент аргининосукцинатлиаза, то в результате расщепления аргининоянтарной кислоты образуется свободный аргинин, и рост микробов в таких случаях указывает па наличие соответствующей ферментативной активности.

- Рекомендуем далее ознакомиться со статьей "Целесообразность скрининга нарушений обмена веществ у детей"

- Вернуться в оглавление раздела "генетика"

Оглавление темы "Болезни обмена веществ у детей":
  1. Вторичные поражения соединительной ткани - причины рахитоподобных поражений
  2. Соединительная ткань при почечно-тубулярном ацидозе (ПТА) у детей - клиника
  3. Витамин D-резистентный рахит (фосфат-диабет) у детей - причины, клиника
  4. Соединительная ткань при болезни де Тони-Дебре—Фанкони у детей
  5. Анализы для диагностики болезней соединительной ткани у детей
  6. Проблемы диагностики нарушений обмена веществ у детей
  7. Пренатальная диагностика нарушений обмена веществ у детей
  8. Скрининг нарушений обмена веществ у детей
  9. Скрининг-программы нарушений обмена веществ у детей
  10. Методы определения активности ферментов

Ждем ваших вопросов и рекомендаций: