Определение ядрышковых организаторов на интерфазных хромосомах. Выявление ядрышковых организаторов в гистопатологии

Количественное определение ядерных AgЯOP в клетке — не такая простая задача, как это кажется на первый взгляд. Ниже мы рассмотрим два метода ее решения, для которых разработаны теоретические основы. Поскольку в ходе клеточного цикла происходит агрегация и дезагрегация ядрышек, а во время митоза они полностью диспергированы, можно предположить, что подсчет числа AgflOP позволит судить о пролиферативной активности клеток. В целом это предположение справедливо, однако хорошо известно, что AgflOP варьируют по форме и размеру: в активно пролиферирующих клетках их размер меньше, чем в клетках с менее активным ростом. И действительно, было показано, что при кожной меланоме и неходжкинской лимфоме определение размера фибриллярного центра позволяет отличить злокачественную меланому от доброкачественной и разграничить высоко- и слабодифференцированную лимфомы.

Разработка любого «нового» метода сталкивается с проблемой стандартизации. Вероятнее всего это связано с применением способов подсчета «точек» AgflOP и неодинаковой продолжительностью окрашивания. Последнее особенно важно, так как при излишнем увеличении времени окрашивания происходит как бы слияние ЯОР, что приводит к занижению их числа. Более информативным поэтому представляется подсчет индивидуальных фибриллярных центров (как свободных, так и входящих в состав ядрышка), поскольку изменение числа ЯОР соответствует дезагрегации ядрышек и, в свою очередь, полиферативной активности клетки. В связи с этим предлагается проводить «титрование» по времени любого изучаемого образца ткани, с тем чтобы подобрать оптимальные условия для выявления и подсчета внутриядрышковых ЯОР.

Хотя с помощью анализатора изображений трудно подсчитать отдельные AgЯOP, недавно эти методы были с успехом применены для выявления некоторых патологий. Анализ основывался на определении общего количества окрашенного серебром материала в ядре, а не числа AgЯOP, для чего пришлось существенно улучшить разрешение оттенков серого цвета. Таким способом удалось разграничить доброкачественные и злокачественные неоплазии.

ядрышковые организаторы

В основе еще одного подхода лежит определение размера AgЯOP. Для этого можно использовать световую микроскопию, работая с увеличенными фотографиями и системами интерактивного анализа изображений, или проводить анализ на ультраструктурном уровне.

В гистопатологии эти методы применяются в следующих случаях:
• разграничение неопластических и не-неопластических заболеваний;
• разграничение сильно- и слабодифференцированных нео-плазий;
• определение пролиферативной активности клеток.

Наиболее интересные результаты получены в первых двух случаях. Мы уже говорили о том, насколько важны правильная интерпретация результатов и подсчет AgЯOP; этому вопросу посвящено много работ, и продолжают выходить все новые. Следующим этапом должно стать применение АgЯОР-методов в прогностических целях, для обнаружения метастазов и повторно возникающих опухолей. Но даже в том случае, если здесь будут достигнуты большие успехи, проблему канцерогенеза удастся решить только частично. В связи с этим очень важным представляется дальнейшее развитие метода.

Большой интерес представляет применение AgЯOP-методов для определения степени пролиферации клеток. Эти методы достаточно дешевы, дают хорошо воспроизводимые результаты и не требуют специального оборудования. Их легко приспособить для исследования архивных залитых в парафин препаратов. Параллельный анализ тканей с помощью мечения антителами Ki67 , проточной цитометрии ДНК и кариотипирования показал, что число AgЯOP действительно коррелирует со степенью пролиферации клеток, а не их плоидностью. Необходимо отметить, однако, что дифференцировка клеток in vitro также может сопровождаться изменением числа AgЯOP.

- Читать далее "Молекулярный анализ нуклеиновых кислот. Выделение нуклеиновых кислот"

Оглавление темы "Исследование ядрышкового организотора. Выделение нуклеиновых кислот":
1. Окрашивание серебром ядрышкового организатора. Окрашивание фибриллярных центров
2. Фоновое окрашивание ядрышкового организатора. Совместимость фиксации и AgЯОР-реакции
3. Ультраструктурный метод выявления ядрышкового организатора. Связывание ионов висмута с ядрышковыми организаторами
4. Гибридизация in situ ядрышкового организатора. Иммуногистоцитохимические методы выявления ядрышкового организатора
5. Определение ядрышковых организаторов на интерфазных хромосомах. Выявление ядрышковых организаторов в гистопатологии
6. Молекулярный анализ нуклеиновых кислот. Выделение нуклеиновых кислот
7. Выделение ДНК. Подготовка образцов для выделения ДНК
8. Выделение высокомолекулярной ДНК. Выделение РНК
9. Выделение РНК с использованием протеиназы К. Техника выделения РНК с протеиназой К
10. Выделение РНК с помощью гуанидинтиоцианата. Техника выделения РНК с гуанидинтиоцианатом

Ждем ваших вопросов и рекомендаций: