Исследование мРНК в биоптатах. Исследование мРНК при цитологии и аутопсии

При ГИС можно использовать биоптаты, полученные при хирургических операциях и эндоскопических исследованиях, аутопсийный материал, цитологические препараты (например, приготовленные из бронхоальвеолярных смывов), тканевые культуры.

Биоптаты, получаемые при хирургических операциях, очень удобны тем, что в этом случае можно взять образец ткани непосредственно из интересующей исследователя области.

Образец необходимо как можно быстрее (в пределах 30 мин после иссечения) зафиксировать. На рисунке приведен пример изотопной гибридизации с мРНК, присутствующей в удаленной при хирургической операции опухоли. Выявление мРНК в опухолевой ткани очень важно, особенно при отсутствии иммунореактивности у изучаемого белка.

Гибридизацию с мРНК можно с успехом проводить и на небольших эндоскопических биоптатах. При биопсии необходимо предпринимать специальные меры для сохранения морфологии биоптатов и предотвращения краевых артефактов, часто возникающих при работе с раздавленными эндоскопическими биоптатами. Рисунок иллюстрирует гибридизацию 32Р-кРНК-зонда с мРНК в биоптате, полученном при эндоскопии бронхов.

исследование мрнк

К числу таких препаратов относятся мазки шейки матки, брон-хоальвеолярные смывы, пунктаты. Клетки можно фиксировать как в растворе, так и после их адгезии на предметном стекле. В случае цитологических препаратов обычно наблюдаются меньшая фоновая гибридизация и неспецифическое связывание метки. Рисунок иллюстрирует гибридизацию 35S-зонда с мРНК, содержащейся в бронхоальвеолярном смыве.

Некоторые ткани человека могут быть получены только при аутопсии. К сожалению, такие ткани утрачивают большую часть мРНК, особенно если аутопсия делается более чем через 25 ч после смерти. Это необходимо учитывать при интерпретации результатов.

Культуры тканей — очень хорошая модельная система при проведении гибридизации с мРНК. В них содержится минимальное количество посторонних клеток и полностью отсутствуют эндогенные белки, что существенно облегчает локализацию мРНК в определенных типах клеточной популяции.

Изотопная ГИС еще не стала рутинным методом исследований, но ее применение уже позволило глубже понять биологию и функциональную морфологию ряда заболеваний. Очень велики возможности метода ГИС при уточнении диагноза, поставленного на основании гистологических данных, а также при наблюдении за теченением заболевания и результативностью терапии.

- Читать далее "Неизотопная гибридизация мРНК. Клеточные линии как модельные системы мРНК"

Оглавление темы "Диагностика мРНК. Исследование мРНК":
1. Размер зонда для мРНК. Работа с тканями для диагностики мРНК
2. Предварительная обработка клеток и тканей. Гибридизация мРНК с кРНК-зондами
3. Отмывание препаратов после гибридизации мРНК. Радиоавтография срезов для выявления мРНК
4. Одновременное проведение гибридизации in situ и иммуноцитохимического анализа мРНК. Контроли и специфичность гибридизации мРНК
5. Специфичность гибридизации мРНК. Интерпретация данных анализа мРНК
6. Исследование мРНК в биоптатах. Исследование мРНК при цитологии и аутопсии<
7. Неизотопная гибридизация мРНК. Клеточные линии как модельные системы мРНК
8. Контроли гибридизации мРНК. Предупреждение загрязнения РНКазами
9. Образцы неизотопной гибридизация мРНК. Фиксация для неизотопной гибридизация мРНК
10. Демаскирование нуклеиновых кислот при неизотопной гибридизации мРНК. Зонды неизотопной гибридизация мРНК

Ждем ваших вопросов и рекомендаций: