При ГИС можно использовать биоптаты, полученные при хирургических операциях и эндоскопических исследованиях, аутопсийный материал, цитологические препараты (например, приготовленные из бронхоальвеолярных смывов), тканевые культуры.

Биоптаты, получаемые при хирургических операциях, очень удобны тем, что в этом случае можно взять образец ткани непосредственно из интересующей исследователя области.

Образец необходимо как можно быстрее (в пределах 30 мин после иссечения) зафиксировать. На рисунке приведен пример изотопной гибридизации с мРНК, присутствующей в удаленной при хирургической операции опухоли. Выявление мРНК в опухолевой ткани очень важно, особенно при отсутствии иммунореактивности у изучаемого белка.

Гибридизацию с мРНК можно с успехом проводить и на небольших эндоскопических биоптатах. При биопсии необходимо предпринимать специальные меры для сохранения морфологии биоптатов и предотвращения краевых артефактов, часто возникающих при работе с раздавленными эндоскопическими биоптатами. Рисунок иллюстрирует гибридизацию 32Р-кРНК-зонда с мРНК в биоптате, полученном при эндоскопии бронхов.

К числу таких препаратов относятся мазки шейки матки, брон-хоальвеолярные смывы, пунктаты. Клетки можно фиксировать как в растворе, так и после их адгезии на предметном стекле. В случае цитологических препаратов обычно наблюдаются меньшая фоновая гибридизация и неспецифическое связывание метки. Рисунок иллюстрирует гибридизацию 35S-зонда с мРНК, содержащейся в бронхоальвеолярном смыве.

Некоторые ткани человека могут быть получены только при аутопсии. К сожалению, такие ткани утрачивают большую часть мРНК, особенно если аутопсия делается более чем через 25 ч после смерти. Это необходимо учитывать при интерпретации результатов.

Культуры тканей — очень хорошая модельная система при проведении гибридизации с мРНК. В них содержится минимальное количество посторонних клеток и полностью отсутствуют эндогенные белки, что существенно облегчает локализацию мРНК в определенных типах клеточной популяции.

Изотопная ГИС еще не стала рутинным методом исследований, но ее применение уже позволило глубже понять биологию и функциональную морфологию ряда заболеваний. Очень велики возможности метода ГИС при уточнении диагноза, поставленного на основании гистологических данных, а также при наблюдении за теченением заболевания и результативностью терапии.

- Читать далее "Неизотопная гибридизация мРНК. Клеточные линии как модельные системы мРНК"