Интерфазная цитогенетика и кариотипирование опухоли. Проточная цитометрия опухоли

Методы дифференциального окрашивания хромосом широко используются для выявления различных генетических аномалий (например при лейкозах), а также в диагностических и прогностических целях, когда соответствующие хромосомные аберрации хорошо известны. В работах сравниваются неизотопные методы интерфазной цитогенетики с классическими цитогенетическими методами анализа клеточных линий, полученных из солидных опухолей, опухолевых клеток костного мозга и перефирической крови.

Несмотря на то что круг выявляемых нарушений ограничивается тем, что используются зонды, специфичные только для околоцентромерных областей, гибридизация с двумя мишенями в интерфазных ядрах позволяет обнаружить также межхромосомные транслокации. В некоторых случаях это удается сделать только ретроспективно, хотя недавно методом гибридизации с двумя мишенями были идентифицированы маркерные хромосомы. В этом случае ГИС-данные использовались для установления природы таких хромосом.

С помощью гибридизации in situ удается также обнаружить очень небольшое число клеток реципиента в трансплантатах костного мозга, полученных от лиц другого пола. В этих случаях мужские клетки, составляющие в популяции женских клеток всего 0,01%, можно было выявить с помощью Y-специфичного зонда.

кариотипирование опухоли

В отсутствие кариотипических данных результаты обычных цитогенетических исследований солидных опухолей могут послужить стимулом к скринингу интерфазных клеток. Показано, что при раке мочевого пузыря имеет место моносомия по хромосоме 9 и трисомия по хромосомам 1 и 7. Исследование с помощью интерфазной цитогенетики переходно-клеточных карцином (низкозлокачественных опухолей), обнаруженных методом проточной цитометрии, показало, что примерно у 60% из них наблюдаются количественные аберрации, затрагивающие по крайней мере одну из хромосом 1, 7 и 9.

Самое удивительное, что около 30% таких карцином оказались моносомными по хромосоме 9. Примерно у 30 и 20% обнаружена трисомия по хромосомам 1 и 7 соответственно. У высокозлокачественных опухолей и/или у опухолей, которые по результатам проточной цитометрии были анеуплоидными/тетраплоидными, по хромосоме 9 часто наблюдается дисомия, в то время как другие хромосомы находятся в тетраплоидном состоянии.

Многочисленные количественные хромосомные аберрации, например полисомия по хромосоме 7 и утрата хромосом 10 и 22, а также половых хромосом, были выявлены при цитогенетических исследованиях опухолей головного мозга. В двух клеточных линиях глиомы с помощью гибридизации in situ была обнаружена утрата хромосомы 22 и полисомия по хромосоме 7. Скрининг этих аберраций с помощью гибридизации зондов, специфичных к центромерной ДНК, с интерфазными ядрами выявил такие же хромосомные аномалии, но с другой, чем описано в литературе, частотой.

Проточная цитометрия опухоли. Важно иметь в виду, что число гибридизационных сигналов для данного зонда, специфичного к центромерной области ДНК, на разных стадиях клеточного цикла, включая G0/G1, S и G2/M, постоянно. Это позволяет отличить популяцию G2/M-клеток «диплоидной» опухоли, выявленной методом проточной цитометрии, от популяции G0/G1-клеток «тетраплоидной» опухоли. В первом случае на каждую хромосому приходится два гибридизационных сигнала, во втором — четыре.

- Читать далее "Рак мочевого пузыря, молочных желез. Опухоли яичек, желудка"

Оглавление темы "Диагностика опухолей. Исследование опухолей":
1. Мечение зондов для выявления опухолевых клеток. Отмывание препаратов после гибридизации
2. Иммуноцитохимическая детекция опухоли. Детекция опухоли в парафиновых срезах
3. Фиксация и обработка опухолевых препаратов. Предварительная обработка клеток опухоли
4. Парафинизированные препараты опухолевых тканей. Гибридизация in situ на парафиновых срезах опухолей
5. Замороженные срезы опухоли. Гибридизация in situ на замороженных срезах опухоли
6. Суспензии изолированных клеток опухоли. Парафиновые срезы опухоли<
7. Интерфазная цитогенетика и кариотипирование опухоли. Проточная цитометрия опухоли
8. Рак мочевого пузыря, молочных желез. Опухоли яичек, желудка
9. Определение гетерогенности опухолей. Выявление клеточных мРНК
10. Линеаризация вектора для определения мРНК. Транскрипция in vitro и мечение зондов мРНК

Ждем ваших вопросов и рекомендаций: