Диагностика вируса гепатита В. Диагностика вируса иммунодефицита человека

Известно несколько форм инфекционного гепатита. Хорошо охарактеризован вирус гепатита В (HBV), для выявления которого имеются специфические серологические тесты. Это небольшой ДНК-содержащий вирус, с трудом поддающийся культивированию. По оценкам, во всем мире насчитывается примерно 200 млн. носителей HBV; они служат резервуаром инфекции. Риск развития гепатоцеллюлярного рака у носителей HBV в 200 раз выше, чем у других людей. С помощью гибридизации in situ HBV-геномы были обнаружены не только в инфицированных вирусом гепато-цитах, но и в эпителиальных клетках желчных протоков, в эндотелии и гладких мышцах.

Это говорит о том, что круг клеток-хозяев HBV шире, чем предполагалось ранее. В самой печени инфицированные гепатоциты можно обнаружить в непосредственной близости от неокрашивающихся клеток, а содержание ДНК HBVb активной зоне гепатита, по-видимому, намного выше, чем в соседствующих с ней раковых клетках. Наличие в клетках ДНК HBV четко коррелирует с присутствием вирусного антигена в гепатоцитах, корового антигена в сыворотке и с циррозом, выявляемым гистологическими методами. В ряде случаев, несмотря на наличие поверхностного антигена вируса гепатита В (HsAg), результаты гибридизации оказываются отрицательными.

Возможно, это связано с тем, что метод гибридизации in situ позволяет обнаружить вирусный геном, только если он присутствует не менее чем в 10 копиях на клетку. По-видимому, клетки, содержащие меньше 10 копий, все же синтезируют HBsAg и другие вирусные белки, несмотря на низкий уровень репликации вирусного генома. И наоборот, гораздо более чувствительные методы гибридизации позволят обнаружить ДНК HBV при латентной инфекции, когда HBsAg синтезируется слишком мало, чтобы его можно было определить стандартными методами. Например, гибридизацией in situ с использованием биотинилированного зонда нам удалось обнаружить ДНК HBV у трех серологически негативных больных — веский аргумент в пользу применения данного метода в целях клинической диагностики.

вирус гепатита В

Вирус иммунодефицита человека (ВИЧ) относится к ретровирусам, чей РНК-геном может встраиваться в хромосомы клетки-хозяина в виде кДНК и находиться в летентном состоянии, когда вирусные белки, выявляемые иммуноцитохимическими методами, не синтезируются. Идентифицировать инфицированные клетки и точно определить их число в препарате можно в этом случае только методом ГИС. Так, с помощью этого метода было показано, что в периферической крови ВИЧ-инфицированных больных вирус активно амплифицируется лишь в очень небольшом числе клеток: 1 на 104-105. Кроме того, методом гибридизации in situ можно показать, что те или иные патологические изменения или клинические симптомы действительно ассоциированы с ВИЧ-инфекцией.

Проводя гибридизацию вирусных зондов с большим набором препаратов, полученных от больных СПИДом, можно получить совершенно новые данные о патогенезе этого заболевания, а применяя для гибридизации другие доступные зонды, например ДНК CMV и EBV, можно исследовать патогенез таких сопутствующих СПИДу заболеваний, как саркома Капоши, лимфома и пневмония.

Данные о применении гибридизации in situ для выявления других вирусов весьма немногочисленны и соответствующие исследования проводились в основном в научных целях. Например, сообщалось об исследовании этим методом ткани головного мозга больного с прогрессирующей лейкоэнцефалопатией, предпринятым для выявления ДНК вируса JC. Предполагается исследовать подобным образом и другие дегенеративные неврологические заболевания с известной или предполагаемой вирусной этиологией: болезнь Альцгеймера, рассеянный склероз, болезнь Крейтцфельда—Якоба и другие. Исследование этих неврологических заболеваний с отсроченной манифестацией особенно ценно, поскольку может прояснить их патогенез.

По-видимому, методы гибридизации in situ будут все шире применяться для исследования вирусных инфекций с большим инкубационным периодом, особенно в тех случаях, когда специфические белковые маркеры либо не выявлены, либо синтезируются в очень малом количестве.

- Читать далее "Генетика опухолевых клеток. Методы анализа генома опухолевых клеток"

Оглавление темы "Диагностика вирусов. Методы выявления РНК и ДНК вирусов":
1. Денатурация для выявления вирусов. Системы детекции вирусов
2. Контроль специфичности гибридизации in situ. Гибридизация ДНК в вирусных препаратах
3. Гибридизация ДНК вирусов в гистологических срезах. Гибридизация in situ ДНК парафиновых срезов с S-зондами
4. Гибридизация вирусов в парафиновых срезах. Радиоавтография вирусов в парафиновых срезах
5. Гибридизация РНК вирусов в тканевых срезах. Гибридизация in situ РНК замороженных срезов
6. Гибридизация вирусов с биотинилированными ДНК-зондами. Техника гибридизации вирусов с биотинилированными зондами
7. Оценка результатов гибридизации вирусов. Чувствительность гибридизации in situ
8. Диагностика вируса папилломы человека. Диагностика цитомегаловируса и вируса простого герпеса
9. Диагностика вируса гепатита В. Диагностика вируса иммунодефицита человека
10. Генетика опухолевых клеток. Методы анализа генома опухолевых клеток

Ждем ваших вопросов и рекомендаций: