Диагностика вируса папилломы человека. Диагностика цитомегаловируса и вируса простого герпеса

Как показывают молекулярно-биологические исследования, вирус папилломы человека (HPV) может индуцировать развитие рака шейки матки и других генитальных новообразований: по имеющимся данным, ДНК HPV присутствует примерно в 80% опухолей шейки матки. В настоящее время известно около 70 типов HPV, которые инфицируют клетки кожи или слизистых. Некоторые из них (например, HPV 16, 18, 31 и 33) особенно характерны для раковых и предраковых состояний. Адекватные серологические тесты на эти вирусы отсутствуют, и их не удается выделить из клинических препаратов культивированием. Иммуноцитохимическими методами можно идентифицировать капсидные антигены HPV, но только в случае продуктивной инфекции.

До недавнего времени для диагностики папилломавирусных инфекций применялись исключительно гистологические методы. Цитологическая диагностика, основанная на классическом койлоцитозе и дискератозе, по мнению некоторых авторов, не может считаться удовлетворительной. На сегодня гибридизация in situ — это оптимальный метод диагностики HPV-инфекции, и во многих случаях он является методом выбора, а иногда и единственным методом, например, если лишь небольшое число опухолевых клеток содержит ДНК HPV. Ложноположительные гибридизационные сигналы распознаются без особого труда.

Для простого обнаружения HPV-геномов гибридизацию обычно проводят в мягких условиях, но некторые типы HPV выявляются только при гибридизации в жестких условиях, при температурах от Тт -7 С до Тт —10 С. Важно помнить, что при гибридизации in situ перекрестная гибридизация наблюдается чаще, чем в случае других методов при аналогичных условиях. Об истинной двойной инфекции можно говорить лишь в том случае, когда гибридизационные сигналы, отвечающие двум типам HPV, обнаруживаются в совершенно разных участках одного биоптата.

выявление вирусов

Цитомегаловирус (CMV) относится к роду герпесвирусов и часто является возбудителем внутриутробных инфекций, приводящих к врожденным уродствам. У больных с ослабленным иммунитетом иитомегаловирусная инфекция может приводить к самым разным заболеваниям: пневмонии, ретиниту, гепатиту, колиту, энцефалопатии. Как правило, CMV-инфекции легко диагностируются обычными гистологическими методами по характерным включениям вирусных частиц. Однако ДНК CMV обнаруживаются также во многих нормальных по виду клетках и тканях, где цитомегаловирусных частиц мало или они вообще отсутствуют.

Для диагностики таких «скрытых» CMV-инфекций, часто не выявляющихся при обычном гистологическом исследовании, полезно использовать гибридизацию in situ. Этот метод более чувствителен, чем обычные цитологические методы, а в ряде случаев — более чувствительный и быстрый, чем вирусное культивирование. Однако следует очень тщательно подбирать зонд для гибридизации, поскольку в геноме CMV имеются протяженные участки, спаривающиеся с ДНК человека.

Вирус простого герпеса. Инфицирование человека вирусом простого герпеса (HSV) типов 1 и 2 распространено очень широко. После заражения вирус находится в клетке-хозяине, главным образом в клетках сенсорного ганглия, в латентной форме. Он вызывает кератит, энцефалит, рецидивирующие острые респираторные заболевания, рецидивирующий герпес гениталий, а у больных с ослабленным иммунитетом — более тяжелые болезни. С помощью гибридизации in situ можно разграничить инфекции, вызванные HSV1 и HSV2. Однако зонды для гибридизации следует при этом подбирать очень тщательно, поскольку геном HSV1 частично гибридизуется с геномом HSV2, а ДНК герпесвирусов проявляет гомологию с клеточной ДНК (мРНК) человека. Во всех случаях необходимо ставить контрольные опыты; кроме того, лучше использовать для гибридизации короткие зонды.

Вирус Эпштейна—Барр (EBV) распространен повсеместно и способен вызывать перс йотирующую инфекцию, напоминающую своим клиническим проявлением простудные заболевания или инфекционный мононуклеоз. Установлена связь EBV с назофарингиальной карциномой и лимфомой Беркитта. У лиц с ослабленным иммунитетом EBV участвует в патогенезе В-клеточных лимфом. Недавно появились данные о связи EBV с волосистой лейкоплакией, которая часто развивается у больных СПИДом. С помощью гибридизации in situ удалось локализовать EBV в клетках лимфомы Беркитта, в эпителиальных клетках носоглотки при карциономе и в гранулярных и шиловидных эпителиальных клетках при волосистой лейкоплакии. Однако содержание вирусных частиц в опухолевых клетках может быть настолько мало, что обнаружить EBV методом гибридизации in situ не удается.

- Читать далее "Диагностика вируса гепатита В. Диагностика вируса иммунодефицита человека"

Оглавление темы "Диагностика вирусов. Методы выявления РНК и ДНК вирусов":
1. Денатурация для выявления вирусов. Системы детекции вирусов
2. Контроль специфичности гибридизации in situ. Гибридизация ДНК в вирусных препаратах
3. Гибридизация ДНК вирусов в гистологических срезах. Гибридизация in situ ДНК парафиновых срезов с S-зондами
4. Гибридизация вирусов в парафиновых срезах. Радиоавтография вирусов в парафиновых срезах
5. Гибридизация РНК вирусов в тканевых срезах. Гибридизация in situ РНК замороженных срезов
6. Гибридизация вирусов с биотинилированными ДНК-зондами. Техника гибридизации вирусов с биотинилированными зондами
7. Оценка результатов гибридизации вирусов. Чувствительность гибридизации in situ
8. Диагностика вируса папилломы человека. Диагностика цитомегаловируса и вируса простого герпеса
9. Диагностика вируса гепатита В. Диагностика вируса иммунодефицита человека
10. Генетика опухолевых клеток. Методы анализа генома опухолевых клеток

Ждем ваших вопросов и рекомендаций: