Когда весь образец ткани израсходован или когда не осталось лишнего материала от проб, взятых для цитологических исследований, прибегают к одному из следующих приемов.

а. Обесцвечивают имеющиеся препараты и окрашивают их заново. Результат повторного окрашивания зависит от природы выявляемого антигена, а также от характера предыдущей фиксации и схемы окрашивания. Несмотря на то, что некоторые устойчивые антигены, например цитокератины и общий лейкоцитарный антиген, могут сохраниться, использование высокочувствительной системы иммунодетекции позволяет решить проблему.

б. Фрагментируют имеющиеся препараты. На один срез или мазок можно нанести два или три разных антитела при условии, что те патологические изменения, которые интересуют исследователя, не локализованы в каком-то одном участке препарата. Стекло с препаратом разрезают на части с помошью алмазного стеклографа (хотя это может осложнить процедуры промывания и окрашивания). Можно разделить препарат на фрагменты с помощью специального иммунохимического воскового карандаша, ручки с флуоресцентными чернилами или аккуратной линией из расплавленного парафина. В каждом случае границу между фрагментами нужно предварительно осушить.
в. Двойное/тройное мечение.

В некоторых случаях на одних и тех же срезах можно проводить и ИЦХ-анализ, и гибридизацию in situ. Осуществимость такой комбинации зависит от влияния на исследуемые антигены тех процедур, которые применяются при гибридизации in situ. В настоящее время такое совмещение методов используется в целях молекулярной клинической диагностики довольно редко.

Автоматизация в иммуноцитохимии

Повторяемость операций, совершаемых при проведении им-муноцитохимических анализов, позволяет автоматизировать метод. Существуют как промышленные приборы для ИЦХ-анализа. так и лабораторные разработки. Выбор той или иной системы зависит от нескольких факторов:
а) качество окраски (чувствительность, воспроизводимость результатов) должно быть не хуже, чем для анализа «вручную»;
б) стоимость анализатора и соответствующих операций должна компенсироваться экономией времени и реактивов;
в) анализатор должен быть достаточно универсален, чтобы его можно было использовать при различных модификациях метода;
г) анализатор должен успешно справляться со всем объемом работ.

В каждой лаборатории эти моменты оцениваются самостоятельно. Но с увеличением объема работ и с появлением проблем, связанных с набором большого числа квалифицированных сотрудников, вопросы автоматизации становятся все более актуальными,

Помимо использования новых антител и систем иммуноокрашивания, можно найти и другие способы улучшения качества окрашивания. При этом стремятся решить по меньшей мере одну из следующих задач:

а) получить более интенсивную окраску;
б) снизить стоимость метода, используя реактивы меньшей концентрации;
в) уменьшить время выполнения операций.

Чтобы решить эти задачи, нужно тщательно выполнять все операции и обращать особое внимание на сохранность антигена и морфологии препарата. Для этого необходимо:
• выбрать подходящий протеолитический фермент и правильную методику работы с ним;
• подобрать оптимальный режим блокирования активности эндогенных ферментов;
• правильно разводить препарат антител;
• тщательно готовить растворы субстратов и усилителей.

- Читать далее "Иммуноокращивание. Методы улучшения иммуноокрашивания"