Лабораторный стол в иммуноцитохимии. Подготовка к окрашиванию и реагенты

Выбрав подходящий иммуноцитохимический метод и подготовив препараты, можно начинать иммуноокрашивание. Многие методические детали отдельных операций мы уже рассмотрели; поясним теперь ряд общих моментов.

Широкому распространению иммуноцитохимических методов способствовало то важное обстоятельство, что необходимое для этого оборудование имеется в любой лаборатории. Если предполагается работать с замороженными и парафиновыми срезами, есть приспособление для изготовления парафиновых срезов и криостат, то понадобятся следующие реактивы и оборудование.

• Жидкий азот или морозильник на -70 "С
• Морозильник на —20 "С
• Холодильник на +4 °С
• Камера для инкубации препаратов
• Микропипетки от 5 мкл до I мл

иммуноцтохимия

• Сосуды для окрашивания, сосуды Коплина, подставки для предметных стекол
• Первые антитела и антитела для контроля
• Антисыворотка со вторыми и третьими антителами и соответствующие реактивы
• Нормальная (блокирующая) сыворотка
• Реактивы для приготовления буферов и растворов субстратов
• Красители для контрастирования срезов и среды для их заключения

Прежде чем приступить к выполнению любого эксперимента, важно правильно организовать работу и предусмотреть все детали. Следует убедиться, что все антисыворотки, реактивы и оборудование имеются в наличии, а все препараты, включая контрольные, приготовлены и маркированы. Если срезы небольшие по площади, то полезно обвести их стеклографом, чтобы они были лучше видны на влажных стеклах. Препараты с нанесенными на них одинаковыми антителами при окрашивании в ванночке имеет смысл обрабатывать вместе.

Следует сгруппировать по партиям и фиксированные формалином, заключенные в парафин препараты, одинаково обработанные протеолитическими ферментами.
В иммуноцитохимии не обращают внимания на правильность приготовления неиммунных реагентов. В то же время от свойств буферных растворов зависит ход иммунологических реакций. Буферы с неподходящим рН могут отрицательно повлиять на морфологию, особенно в цитологических мазках и замороженных срезах, которые фиксируются очень слабо, а также привести к отлипанию препаратов от предметного стекла. Как правило, нет необходимости каждый раз готовить свежий буферный раствор, но его следует правильно хранить.

Старые маточные буферные растворы могут быть загрязнены грибами и другими микроорганизмами, которые проявятся на поверхности окрашиваемого среза.

- Читать далее "Работа с препаратами в иммуноцитохимии. Специальные методы окрашивания"

Оглавление темы "Молекулярная диагностика. Иммуноцитохимия":
1. Молекулярная клиническая диагностика. История молекулярной клинической диагностики
2. Фенотипирование. Генотипирование
3. Анализ экстрактов тканей. Методы молекулярной диагностики тканей
4. Перспективы молекулярной диагностики. Золото в иммуноцитохимии
5. Контроль в иммуноцитохимии. Контроль реактивов и тканей
6. Лабораторный стол в иммуноцитохимии. Подготовка к окрашиванию и реагенты
7. Работа с препаратами в иммуноцитохимии. Специальные методы окрашивания
8. Проблема нехватки материала в иммуноцитохимии. Автоматизация в иммуноцитохимии
9. Иммуноокращивание. Методы улучшения иммуноокрашивания
10. Удаление пигмента с препаратов. Улучшение качества препаратов

Ждем ваших вопросов и рекомендаций: