Анализ экстрактов тканей. Методы молекулярной диагностики тканей

Вероятно, наиболее существенный вклад молекулярных методов в диагностику различных патологий связан с изучением молекулярных нарушений при моногенных наследственных заболеваниях. Сейчас возможна пренатальная диагностика многих таких заболеваний, что позволяет снять обеспокоенность будущих родителей и дает большой экономический и социальный эффект. Раньше для выявления молекулярных нарушений при наследственных заболеваниях использовали метод, основанный на полиморфизме длины рестрикционных фрагментов (ПДРФ). Сегодня в отдельных семьях удается идентифицировать многие специфические нарушения, лежащие в основе наследственных заболеваний, на уровне генов. При этом оказалось, что заболевания, неразличимые по клиническим проявлениям, на молекулярном уровне могут различаться. Это очень важно для пренатальной диагностики.

Иногда при проведении пренатальной диагностики приходится решать такую проблему, как установление отцовства. Большую помощь в этом могут оказать методы рекомбинантных ДНК с использованием техники «отпечатков пальцев» (молекулярной дактилоскопии), которые позволяют точно установить родство ребенка с его предполагаемым отцом. До недавних пор в качестве исходного материала для пренатальной диагностики использовали клетки ворсинок хориона или амниотической жидкости. Однако, поскольку в первом триместре беременности в крови матери присутствуют клетки плода, при успешном разделении этих клеток и циркулирующих клеток крови матери для пренатальной диагностики можно будет использовать пробы крови беременной женщины.

Пока же такая диагностика затрудняется тем, что на фоне большого количества материнской ДНК в крови трудно выявить генетический материал плода. Тем не менее этот метод позволяет определить пол плода в 75% случаев. Его очевидное преимущество состоит в том, что он не требует проведения довольно рискованных процедур амниоцентеза или биопсии ворсинок хориона; в настоящее время этот метод применяется для выявления моногенных заболеваний.

молекулярная диагностика

Основными методами при молекулярном диагностическом исследовании ткани как целого являются блот-гибридизация по Саузерну, Нозерн-гибридизация и секвенирование. Сейчас проведение соответствующих тестов упростилось благодаря возможности многократной амплификации всего нескольких молекул нуклеиновых кислот методом ПЦР. Это позволяет проводить экспресс-анализ, располагая минимальными количествами ДНК, полученными, например, из смыва ротовой полости или из пробы крови, взятой из пальца. Усовершенствованные методы идентификации ДНК, амплифицированной с помощью ПЦР, позволяют устанавливать причины вирусных и наследственных заболеваний.

Так, больших успехов удалось достичь в выявлении в образцах тканей вируса папилломы, вируса иммунодефицита человека, цитомегаловируса, вируса гепатита С, хламидий.

Молекулярная клиническая диагностика не только позволяет исследовать патогенез инфекционных и наследственных заболеваний; она используется также для характеристики солидных опухолей — например, с ее помощью можно исследовать перестройки генов в лимфомах. Одна из проблем в изучении таких опухолей связана с тем, что последние помимо раковых клеток содержат разнообразные обеспечивающие их рост стромальные клетки, например клетки кровеносных сосудов. В большинстве опухолей присутствует более 15 типов стромальных клеток, а опухолевые клетки вследствие амплификации и делеций части генома per se отличаются в свою очередь от клеток стромы.

И хотя исследование ткани как целого не позволяет различать типы клеток, оно все же дает полезную информацию. Недавно были разработаны методы выявления нарушений нуклеиновых кислот в клетках архивных биоптатов опухолей. По-видимому, наиболее широко используется сравнительно простой метод анализа одноцепочечного конформационного полиморфизма (SSCP), который дает возможность выявлять нормальные и мутантные аллели генов в микропробах тканей. Этот генетический скрининг позволил обнаружить мутантные онкогены, амплификации и делеций в ДНК спорадических опухолей. Все эти методы дают ценную научную и клиническую информацию, а одним из самых больших достижений является идентификация генетических нарушений, лежащих в основе предопухолевого состояния и имеющих прогностическое значение в случае метастазирующих опухолей. При этом очень ценным объектом исследований являются архивные биоптаты, поскольку для них известны клинические проявления таких нарушений. Подобные тесты позволяют быстро выяснить, является ли новый предполагаемый маркер значимым для диагностики опухоли и прогнозирования ее развития.

- Читать далее "Перспективы молекулярной диагностики. Золото в иммуноцитохимии"

Оглавление темы "Молекулярная диагностика. Иммуноцитохимия":
1. Молекулярная клиническая диагностика. История молекулярной клинической диагностики
2. Фенотипирование. Генотипирование
3. Анализ экстрактов тканей. Методы молекулярной диагностики тканей
4. Перспективы молекулярной диагностики. Золото в иммуноцитохимии
5. Контроль в иммуноцитохимии. Контроль реактивов и тканей
6. Лабораторный стол в иммуноцитохимии. Подготовка к окрашиванию и реагенты
7. Работа с препаратами в иммуноцитохимии. Специальные методы окрашивания
8. Проблема нехватки материала в иммуноцитохимии. Автоматизация в иммуноцитохимии
9. Иммуноокращивание. Методы улучшения иммуноокрашивания
10. Удаление пигмента с препаратов. Улучшение качества препаратов

Ждем ваших вопросов и рекомендаций: