Требования и характеристики ДГЭ. Закрытая архитектурная система по генетике

Основой любой технологии является метод, имеющий в аналитической практике свои характеристики (параметры). Для ДГЭ они должны соответствовать следующим требованиям:

— разрешающая способность, связана с определенной точностью определения соседних генов;
— чувствительность — граница n-последовательностей разведения, дающих возможность статистически достоверно регистрировать изменения ДГЭ;
— охват — процент экспрессированных генов данного вида экспериментальных животных или определенной ткани, которые могут быть надежно определены и экспериментально повторяться;
— фальшпозитивная норма — количество генов, ошибочно отнесенных к экспрессированным;
— фальшнегативная норма — количество экспрессированных генов, однако отнесенных к неактивным.

Технологии ДГЭ включают две группы методов. Одна из них, так называемая закрытая, а вторая — открытая архитектурная система.

архитектурная система

Закрытая архитектурная система требует информацию о каждом гене или клоне и использует в качестве анализатора микрочипы.
Теория создания микрочипов основана на гибридизации оли-гонуклеотидов известной последовательности, иммобилизованных на твердой поверхности в строго определенных местах, с меченой различными способами пробой. Способствовали созданию данной технологии последние достижения в информатике, химии полупроводников, микроэлектронной промышленности, а также обилие информации, которая накопилась за годы работы над программой «Геном человека».

ДНК-чип — миниатюрная пластина с микроячейками. Каждая микроячейка содержит искусственно синтезированные олигонуклеотиды, соответствующие фрагментам определенных генов, выступающих в качестве матрицы. В этих ячейках происходит комплементарное взаимодействие матрицы и пробы (кДНК исследуемых образцов). В настоящее время существует два направления в создании ДНК-чипов. Они различаются способом синтеза и нанесения матричных олигонуклеотидов.

Первое направление основано на предварительном синтезе олигонуклеотидов. Олигонуклеотиды синтезируют химически или с помощью ПЦР (длина от 500 до 5000 оснований) и затем наносят на обработанную специальным образом стеклянную поверхность с помощью роботов. Такие типы чипов получили название кДНК-микрочипов (cDNA-microarray). В ПЦР амплифицируются последовательности кДНК определенных генов. Поэтому данный тип чипов дорогостоящий, так как необходимо создавать собственную кДНК-библиотеку или приобретать ее у крупных исследовательских центров.кДНК-Микрочипы оказались непригодными для проведения исследований полиморфизма (генетическая изменчивость отдельного локуса в определенной популяции), мутационного анализа, сравнительного изучения экспрессии большого количества генов, так как плотность размещения матричных олигонуклеотидов очень ограничена (число ячеек составляет = 1000 на чип). Кроме того, применение длинных фрагментов ДНК (кДНК) снижает специфичность гибридизации с исследуемой пробой и появляются ложноположительные сигналы, не соответствующие реальной экспрессии генов.

Несмотря на перечисленные недостатки, основное преимущество кДНК-микрочипов — возможность варьирования качественным и количественным составом фрагментов генов.

Более перспективное направление создания чипов — применение фотолитографических технологий, которые дают возможность одновременно интегрировать огромное количество олигонуклеотидов любой последовательности непосредственно на поверхности чипа. Плотность размещения синтезированных таким образом нуклеотидов может достигать 1 млн. на 1 см2. Такие чипы, получившие названия ДНК-чипов (DNA-chips), производятся фирмой Affymetrix Inc.

- Читать далее "Матрица ДНК-чипа. Открытая архитектурная система в фармации"

Оглавление темы "Фармакогеномика и фармакогенетика":
1. Биоаналитические системы в фармакологии. Биоаналитическая аппаратура
2. Дозированные касеты в фармации. Взаимосвязь структуры веществ—фармакокинетических свойств
3. Фармакогеномика. Протеомика и геном человека
4. Расшифровка первичной структуры белков. Секвенирование генома человека
5. Дифференциальная экспрессия гена. Экспрессия генов на фоне болезней
6. Требования и характеристики ДГЭ. Закрытая архитектурная система по генетике
7. Матрица ДНК-чипа. Открытая архитектурная система в фармации
8. Метод дифференциального дисплея. Техника и значение метода дифференциального дисплея
9. Метод вычитающейся гибридизации. Метод репрезентативного дифференциального анализа
10. Результат ДГЭ. Фармакогенетика

Ждем ваших вопросов и рекомендаций: