Выявление антител к сперматозоидам. Тест Фриберга

Определение антиспермальных антител в настоящее время становится одним из самых востребованных тестов при диагностике бесплодия. В диагностических целях проводится:
• Качественное определение АСАТ.
• Количественное определение АСАТ.
• Определение специфических комплексов антиген-антитело ,

Качественное определение АСАТ. Агглютинирующие тесты: инкубация семенной плазмы пациента с отмытыми донорскими сперматозоидами. Недостаток - неспецифическая агглютинация в присутствии бактерий, плазменных факторов. Кроме того, тест позволяет оценить присутствие только агглютинирующих антител.
Тем не менее тест прост в постановке и не требует специальных реагентов. Ниже приводится одна из модификаций агглютинирующего теста (тест Фриберга).

антитела к сперматозоидам

Тест Фриберга

Материал исследования. Для исследования берутся: семенная плазма (центрифугирование 1500 g 10-15 мин); сыворотка крови (центрифугирование 1500 g 10-15 мин, затем инактивация сыворотки при 56 °С 30 мин); цервикальная слизь без предварительной обработки; сперма донора (с заведомо известным отрицательным результатом на антиспермальные антитела и концентрацией сперматозоидов не ниже 40 млн/мл), желательно собранная непосредственно перед исследованием (или размороженная).

Расходный материал и приборы. Из приборов и материалов понадобятся микроскоп, иммунологический планшет (с лунками U-типа) или микропробирки, автоматические дозаторы (на 0,04 мл и 0,1-0,3 мл) одноразовыми наконечниками.
В эякуляте донора подсчитывают концентрацию сперматозоидов. При необходимости эякулят разводят фосфатно-солевым буфером, чтобы получить концентрацию 40 млн/мл.
Фосфатно-солевой нейтральный буфер (рН 7,2-7,4) можно приготовить из концентрата (обязателен контроль рН) или из навесок исходных солей.

Рецепт приготовления буфера:
1. Калий фосфорнокислый однозамещенный.
2. Натрий фосфорнокислый двузамещенный (Na2HP04)-2,17r.
3. Натрий хлористый (NaCl) - 8,5 г. Навески солей растворить в 700-800 мл бидистиллированной воды, довести до 1 литра в мерной колбе, проконтролировать рН (7,2-7,4). Проведение реакции. В лунках планшета (или пробирках) проводят серию разведений исследуемого материала пациента (7 разведений) от 1:4 до 1:256. Для этого в первую лунку приливают 0,3 мл буфера, в остальные шесть - по 0,2 мл. В первую лунку добавляют 0,1 мл исследуемого материала, перемешивают. Затем из нее переносят 0,2 мл смеси во вторую лунку, перемешивают, из нее - 0,2 мл в третью, перемешивают и т. д. до седьмой лунки (1:256). Из седьмой лунки после перемешивания 0,2 мл смеси просто удаляют. Для каждого исследуемого образца необходимо использовать новый наконечник. К каждой лунке добавляют 0,04 мл донорских сперматозоидов и хорошо перемешивают. Планшет или пробирки следует закрыть крышками и инкубировать при 18-20 °С в течение 4 часов. После окончания инкубации из каждой лунки, предварительно перемешав, берут по одной капле и наносят на предметное стекло. Препарат исследуют под покровным стеклом в световом или фазово-контрастном микроскопе при малом и большом увеличении (х400, х600), подсчитывая количество агглютинатов в поле зрения. Последнее разведение, где наблюдается 3 или более агглютинатов в поле зрения, принимается за титр агглютинирующих антител. Наличие агглютинации в титре 1:4 и 1:8 может рассматриваться как неспецифическая реакция. Начиная с титра 1:16 и выше агглютинация доказывает наличие специфических антител и может свидетельствовать об иммунном механизме бесплодия.

- Читать далее "Смешанная реакция агглютинации сперматозоидов. Тест сперматозоидов с латексными частицами"

Оглавление темы "Состав эякулята. Биохимия эякулята":
1. Выявление антител к сперматозоидам. Тест Фриберга
2. Смешанная реакция агглютинации сперматозоидов. Тест сперматозоидов с латексными частицами
3. Непрямой тест сперматозоидов с иммунными шариками. Исследование взаимодействия сперматозоидов с цервикальной слизью
4. Получение цервикальной слизи. Оценка цервикальной слизи
5. Биохимическое исследование спермы. Биохимический состав эякулята
6. Определение концентрации фруктозы в эякуляте. Концентрация цитрата, цинка в эякуляте
7. Гликозидаза семенной жидкости. Определение концентрации гликозидазы в семенной плазме
8. Достоверность исследования семенной жидкости. Контроль качества исследований эякулята
9. Внешний контроль исследований эякулята. Ошибки исследования спермы

Ждем ваших вопросов и рекомендаций: