Расширение объемов трансплантации стволовых клеток пуповинной крови связано не только с разработкой методов их получения, но и хранения. Существует немало проблем, непосредственно связанных с подготовкой кордовой крови к длительному хранению и выбором оптимальной технологии криоконсервирования ее образцов.

Среди них — вопросы целесообразности выполнения сепарационных процедур, использования различных криоконсервирующих сред и применения способов подготовки размороженных клеток к трансплантации (Перехрестенко и др., 2001). Транспортировка нативных образцов пуповинной крови нередко осуществляется из регионов, удаленных от гематологических центров.

В связи с этим возникает проблема допустимых сроков хранения кордовой крови от момента ее получения до начала криоконсервации, что имеет особое значение при создании банков пуповинной крови (Harris, 1996; Wagner, 1997; Ikuta, 1998; Kogler et al, 1998).

Исследование функциональной активности гемопоэтических клеток пуповинной крови после длительного хранения (до 12 лет) в жидком азоте позволило установить, что около 95% кроветворных клеток на протяжении этого времени не утрачивают свою высокую пролиферативную способность (Mugishima, et al., 1989).

В работе С. Юрасова и соавторов (1997) доказано, что хранение пуповинной крови при комнатной температуре (22°С) или при температуре 4°С в течение 24 и 48 часов существенно не снижает жизнеспособность кроветворных клеток, которая от исходного уровня составляет соответственно 92 и 88%.

Однако в случае продления срока хранения до трех суток количество жизнеспособных ядросодержащих клеток в кордовой крови значительно уменьшается. В то же время в ходе других исследований установлено, что при хранении в течение 2-3 суток при температуре 22 или 4°С прежде всего страдает жизнеспособность зрелых гранулоцитов, а не гемопоэтических клеток (Abdel-Mageed et al., 1997; Hubl et al, 1997).

На жизнеспособность стволовых клеток кордовой крови негативное влияние могут оказывать компоненты систем для ее забора. Анализ влияния различных антикоагулянтов, механизм действия которых обусловлен связыванием ионов кальция (ACD, EDTA, XAPD-1), на гемопоэтические клетки-предшественники в условиях хранения кордовой крови от 24 до 72 часов выявил их отрицательное воздействие на жизнеспособность ядросодержащих клеток.

В связи с этим авторы рекомендуют использовать PBS (раствор фосфатного буфера) с добавлением нативного гепарина без консерванта в концентрации 20 ЕД/мл, что, по их мнению, позволяет увеличить длительность хранения нефракционированной пуповинной крови до 72 часов pi сберегает функциональную активность колониеобразующих единиц (Machalinski et al., 1997).

Однако при исследовании сохранности CFU-GM и CFU-G показано, что время хранения пуповинной крови до начала криоконсервации не должно превышать девяти часов (Shlebak et al., 1999). Очевидно, в данном случае должен действовать принцип, согласно которому при наличии противоречивых данных следует использовать минимальный рекомендуемый срок хранения кордовой крови и приступать к программируемой заморозке выделенных клеток как можно быстрее.

При замораживании гемопоэтическими стволовыми клетками пуповинной крови в качестве криопротектора обычно используется 10% раствор ДМСО. Однако, помимо выраженного криопротекторного действия, диметилсульфоксид в такой концентрации оказывает и прямой цитотоксический эффект, даже при условии минимальной его экспозиции с кроветворными клетками кордовой крови.

Для уменьшения цитотоксического действия ДМСО применяется нулевая температура экспозиции, повышение скорости проведения всех манипуляций и многократное отмывание после размораживания образцов пуповинной крови (Boyse et al., 1991; Rubinstein et al., 1993).

- Вернуться в оглавление раздела "Патофизиология."