Правила получения пуповинной крови. Применение пуповинной крови

Сама процедура получения пуповинной крови должна выполняться в строгом соответствии принципам медицинской биоэтики. До начала забора крови необходимо получить согласие беременной женщины на его осуществление (Cullough et al., 1994).

Предварительная беседа с беременной для получения информированного согласия на выполнение всех манипуляций, начиная с эксфузии крови и заканчивая заполнением документации, проводится только медицинскими работниками. Ни в коем случае недопустимо выполнение любой из этих процедур персоналом, имеющим биологическое, химическое, фармацевтическое и другое немедицинское образование, ввиду нарушения установленных норм биоэтики и прав человека (Абдулкадыров, Романенко, 2003).

При положительных тестах на носительство HBsAg, наличие антител к возбудителям гепатита С, ВИЧ-инфекции и сифилиса пуповинную кровь не забирают, а образцы уже собранной крови выбраковываются и уничтожаются (Кетап et al., 1993; Cullough et al., 1994; Newburger et al., 1996; Toren et al, 1997).

Важным моментом применения пуповинной крови в клинике является оценка трансплантата, в основе которой лежит определение количества кроветворных стволовых клеток в образце кордовой крови и доз клеток, необходимых для пересадки (Bender et al., 1994; Gonzalez et al., 1997; Traineau, Dal Cortivo, 1998).

В настоящее время еще не разработаны стандарты оптимального количества клеток кордовой крови, требуемого для трансплантации. Нет общепринятой точки зрения даже на такие рутинные параметры, как количество СD34-позитивных клеток и CFU-GM. Некоторые авторы оценивают потенциал кроветворных клеток посредством анализа долгосрочных культур с определением содержания колониеобразующих единиц, общих для гранулоцитов, эритроцитов, моноцитов и мегакариоцитов — CFU-GEMM.

Однако в клинических условиях стандартная оценка трансплантата пуповинной крови включает, как правило, лишь определение количества ядросодержащих или мононуклеарных клеток (Pettengell et al, 1994).

клетки пуповинной крови

Некоторые проблемы существут и в технологии хранения гемопоэтических клеток пуповинной крови. При криоконсервации ГСК для достижения оптимального режима их замораживания необходимо максимально уменьшить объем кордовой крови, а также предварительно удалить эритроциты во избежание гемолиза pi опасности развития реакции несовместимости по эритроцитарным антигенам (ABO, Rh).

Для этих целей пригодны различные способы выделения ядросодержащих клеток. В начале 90-х годов прошлого века наибольшее распространение получил метод выделения ядросодержащих клеток в градиенте плотности на основе фиколла с плотностью 1,077 г/мл или перкола с плотностью 1,080 г/мл.

Сепарация кордовой крови в градиенте плотности позволяет выделить преимущественно мононуклеарные клетки, но приводит к значительным потерям гемопоэтических клеток-предшественников — до 30-50% (Вгохтеуеr, 1991).

Седиментирующая эффективность гидроксиэтилкрахмала в процессе выделения кроветворных клеток кордовой крови оценивается по-разному. Одни авторы (Broxmeyer et al, 1989; Agarwal et al, 1993; Ultman et al., 1993; Моисеев и др., 1994; Denning-Kendall et al., 1996) указывают на низкое качество сепарации с помощью этого метода, другие исследователи, наоборот, среди всех возможных способов отдают предпочтение выделению ГСК пуповинной крови именно с использованием 6% раствора гидроксиэтилкрахмала. При этом подчеркивается высокая эффективность седиментации гемопоэтических клеток, которая, по некоторым данным, достигает от 84% (Herold et al, 1997, 1998) до 90% (Querol et al, 1998; Regidor et al, 1999).

Сторонники иной точки зрения считают, что практически все способы фракционирования сопряжены с большими потерями ядросодержащих клеток и предлагают производить сепарацию путем центрифугирования, разделяя пуповинную кровь на 3 фракции: эритроцитарную, лейкоцитарное кольцо и плазму.

Выделяя клетки таким способом, авторы установили, что содержание мононуклеарных клеток, ранних гемопоэтических клеток-предшественников и клеток с иммунофенотипом CD34+ в конечном итоге составило соответственно 90, 88 и 100% от исходного уровня (Ademokun et al., 1997). Подобные величины прироста очищенных этим методом клеток кордовой крови получены и другими исследователями (Piacibello et al., 1997): после седиментации выделено 92% ядросодержащих, 98% — мононуклеарных, 96% — СD34-позитивных клеток и 106% колониеобразующих единиц.

В конце 90-х годов в качестве седиментирующего средства широкое применение получила желатина. В клинической практике с помощью желатины ГСК из пуповинной крови выделяют с 1994 года. При использовании 3% раствора желатины эффективность выделения ядросодержащих клеток достигает 88-94% (Pahawa, 1994).

Широкомасштабное применение желатины при создании банка кордовой крови подтвердило ее преимущества перед другими седиментирующими средствами (Lazzari et al., 1996). Сравнительный анализ эффективности всех вышеперечисленных способов выделения ядросодержащих клеток в условиях их последовательного применения на каждом из тестируемых образцов пуповинной крови доказал, что оптимальным седиментатором по выходу мононуклеарных клеток с фенотипом CD34+/CD45+, а также по числу CFU-GM и CFU-GEMM является 3% раствор желатины. Значительно менее эффективными оказались методы с использованием градиента плотности фиколла, а также применение гидроксиэтилкрахмала и метилцеллюлозы, при которых потери гемопоэтических клеток достигали 60% (Denning-Kendall et al., 1996).

- Читать далее "Активность гемопоэтических клеток пуповинной крови. Жизнеспособность клеток кордовой клетки"

Оглавление темы "Гемопоэтические стволовые клетки":
1. Ценность гемопоэтических стволовых клеток. Производные гемопоэза стволовой клетки
2. Сопутствующие клетки. Характеристика гемопоэтических стволовых клеток
3. Выделение гемопоэтических стволовых клеток. Маркеры гемопоэтических стволовых клеток
4. Фенотип гемопоэтических стволовых клеток. Источники гемопоэтических стволовых клеток
5. Различия гемопоэтических стволовых клеток. Первичный гемопоэз
6. Гемопоэтические стволовые клетки пуповинной крови. Пуповинная кровь
7. Стволовые клетки кордовой крови. Примитивные гемопоэтические клетки пуповинной крови
8. Получение стволовых клеток из кордовой крови. Получение пуповинной крови
9. Правила получения пуповинной крови. Применение пуповинной крови
10. Активность гемопоэтических клеток пуповинной крови. Жизнеспособность клеток кордовой клетки

Ждем ваших вопросов и рекомендаций: