Технология получения материала имеет первоочередное значение для подготовки качественного образца относительно объема, содержания и чистоты клеточной суспензии. Из существующих методов забора кордовой крови, которыеусловно классифицируют на закрытую, полуоткрытую и открытую системы,следуетотдавать предпочтение первой, поскольку в закрытой системе существенно снижается риск микробного загрязнения материала, а также контаминации клеточной суспензии материнскими клетками (Cairo, Wagner, 1997).

A. Nagler и соавторы (1998) провели сравнительный анализ эффективности всех трех систем забора кордовой крови. Наиболее частое инфицирование образцов кордовой крови отмечалось при использовании открытой системы. Установлена прямая корреляционная зависимость между массой плаценты и объемом извлекаемой крови — с увеличением массы плаценты количество собираемой крови возрастает.

После забора пуповинной крови следует этап сепарации — выделение мононуклеарных клеток и очищение клеточной суспензии от эритроцитов. В условиях эксперимента ядросодержащие клетки выделяют методом их седиментации метилцеллюлозой при лизисе эритроцитов аммония хлоридом.

Однако в клинических целях применять метилцеллюлозу не следует, так как потери на ней гемопоэтических стволовых клеток достигают 50-90% (Denning-Kendall et al., 1996). Лизирование эритроцитов в связи с большими объемами рабочего раствора в клинике также почти не проводится, хотя процент выделения таким способом ядросодержащих клеток с фенотипом CD34+, а также клеток-предшественников с функциями CFU-GM и CFU-GEMM значительно выше (Denning-Kendall et al, 1996).

Сообщается о появлении нового средства для выделения мононуклеарных клеток в градиенте плотности buyant density solution (BDS72). Это вещество имеет следующие физиологические параметры: рН — 7,4, осмоляльность — 280 мосм/кг, плотность — 1,0720 г/мл. По мнению авторов, с его помощью можно выделить до 100% СD34-позитивных клеток и удалить 98% эритроцитов. Однако в клинике BDS72 пока еще не применяется (Hasan, Van Vlasselaer, 1997).
В апробированных методиках выделения ядросодержащих клеток из кордовой крови обычно используется 10% раствор гидроксиэтилкрахмала или 3% раствор желатины.

Получение пуповинной крови

В целом утвердились критерии оценки количества кроветворных клеток и требования к исследованию образцов кордовой крови с целью выявления инфекционных возбудителей. Дабы обезопасить трансплантацию гемопоэтических клеток пуповинной крови, все образцы крови необходимо исследовать прежде всего на инфекции, передаваемые гематогенным путем, и генетические заболевания (Cullough et al., 1994; lsomura et al., 1997; Toren et al, 1997; Warwick et al., 1998).

Согласно рекомендациями Ticheli и соавторов (1998), в каждом образце пуповинной крови необходимо определять количество ядросодержащих клеток, СD34-позитивных клеток и CFU-GM, провести HLA-типирование, определить группу крови по АВО и ее резус-принадлежность.

- Читать далее "Правила получения пуповинной крови. Применение пуповинной крови"