Получение стволовых клеток из кордовой крови. Получение пуповинной крови

Технология получения материала имеет первоочередное значение для подготовки качественного образца относительно объема, содержания и чистоты клеточной суспензии. Из существующих методов забора кордовой крови, которыеусловно классифицируют на закрытую, полуоткрытую и открытую системы,следуетотдавать предпочтение первой, поскольку в закрытой системе существенно снижается риск микробного загрязнения материала, а также контаминации клеточной суспензии материнскими клетками (Cairo, Wagner, 1997).

A. Nagler и соавторы (1998) провели сравнительный анализ эффективности всех трех систем забора кордовой крови. Наиболее частое инфицирование образцов кордовой крови отмечалось при использовании открытой системы. Установлена прямая корреляционная зависимость между массой плаценты и объемом извлекаемой крови — с увеличением массы плаценты количество собираемой крови возрастает.

После забора пуповинной крови следует этап сепарации — выделение мононуклеарных клеток и очищение клеточной суспензии от эритроцитов. В условиях эксперимента ядросодержащие клетки выделяют методом их седиментации метилцеллюлозой при лизисе эритроцитов аммония хлоридом.

Однако в клинических целях применять метилцеллюлозу не следует, так как потери на ней гемопоэтических стволовых клеток достигают 50-90% (Denning-Kendall et al., 1996). Лизирование эритроцитов в связи с большими объемами рабочего раствора в клинике также почти не проводится, хотя процент выделения таким способом ядросодержащих клеток с фенотипом CD34+, а также клеток-предшественников с функциями CFU-GM и CFU-GEMM значительно выше (Denning-Kendall et al, 1996).

стволовые клетки

Сообщается о появлении нового средства для выделения мононуклеарных клеток в градиенте плотности buyant density solution (BDS72). Это вещество имеет следующие физиологические параметры: рН — 7,4, осмоляльность — 280 мосм/кг, плотность — 1,0720 г/мл. По мнению авторов, с его помощью можно выделить до 100% СD34-позитивных клеток и удалить 98% эритроцитов. Однако в клинике BDS72 пока еще не применяется (Hasan, Van Vlasselaer, 1997).
В апробированных методиках выделения ядросодержащих клеток из кордовой крови обычно используется 10% раствор гидроксиэтилкрахмала или 3% раствор желатины.

Получение пуповинной крови

В целом утвердились критерии оценки количества кроветворных клеток и требования к исследованию образцов кордовой крови с целью выявления инфекционных возбудителей. Дабы обезопасить трансплантацию гемопоэтических клеток пуповинной крови, все образцы крови необходимо исследовать прежде всего на инфекции, передаваемые гематогенным путем, и генетические заболевания (Cullough et al., 1994; lsomura et al., 1997; Toren et al, 1997; Warwick et al., 1998).

Согласно рекомендациями Ticheli и соавторов (1998), в каждом образце пуповинной крови необходимо определять количество ядросодержащих клеток, СD34-позитивных клеток и CFU-GM, провести HLA-типирование, определить группу крови по АВО и ее резус-принадлежность.

- Читать далее "Правила получения пуповинной крови. Применение пуповинной крови"

Оглавление темы "Гемопоэтические стволовые клетки":
1. Ценность гемопоэтических стволовых клеток. Производные гемопоэза стволовой клетки
2. Сопутствующие клетки. Характеристика гемопоэтических стволовых клеток
3. Выделение гемопоэтических стволовых клеток. Маркеры гемопоэтических стволовых клеток
4. Фенотип гемопоэтических стволовых клеток. Источники гемопоэтических стволовых клеток
5. Различия гемопоэтических стволовых клеток. Первичный гемопоэз
6. Гемопоэтические стволовые клетки пуповинной крови. Пуповинная кровь
7. Стволовые клетки кордовой крови. Примитивные гемопоэтические клетки пуповинной крови
8. Получение стволовых клеток из кордовой крови. Получение пуповинной крови
9. Правила получения пуповинной крови. Применение пуповинной крови
10. Активность гемопоэтических клеток пуповинной крови. Жизнеспособность клеток кордовой клетки

Ждем ваших вопросов и рекомендаций: