Выделение гемопоэтических стволовых клеток. Маркеры гемопоэтических стволовых клеток

Поиск возможностей более качественного выделения гемопоэтических стволовых клеток продолжается. Однако стволовые кроветворные клетки морфологически подобны лимфоцитам и представляют собой относительно однородную совокупность клеток с почти круглыми ядрами, мелкодисперсным хроматином и небольшим количеством слабобазофильной цитоплазмы (Андреева и др., 1999; Woods et al., 2001). Точное их количество определить тоже сложно. Допускается, что ГСК в костном мозге человека встречаются с частотой 1 на 106 ядросодержащих клеток.

Для улучшения качества идентификации гемопоэтических стволовых клеток проводится последовательное или одновременное (на многоканальном сортере) исследование спектра мембранносвязанных антигенов, причем в ГСК фенотип CD34+CD38 должен сочетаться с отсутствием маркеров линейной дифференцировки, особенно антигенов иммунокомпетентных клеток, таких как CD4, поверхностные иммуноглобулины и гликофорин (Чертков, Дризе, 1998).

Практически все схемы фенотипирования гемопоэтических стволовых клеток включают определение антигена CD34. Этот гликопротеид с молекулярной массой около 110 кДа, несущий несколько сайтов гликозилирования, экспрессируется на плазматической клеточной мембране после активации соответствующего гена, локализованного на 1-й хромосоме. Функция молекулы CD34 связана с L-селектинопосредованным взаимодействием ранних клеток-предшественников кроветворения со стромальной основой костного мозга. Однако следует помнить, что наличие антигена CD34 на поверхности клетки позволяет произвести только предварительную оценку содержания ГСК в клеточной суспензии, поскольку он экспрессируется и другими клетками-предшественниками гемопоэза, а также стромальными клетками костного мозга (Simmons, Torok-Strob, 1991) и эндотелиальными клетками (Shamblott et al., 2001).

В процессе дифференцировки гемопоэтических клеток-предшественников экспрессия CD34 перманентно снижается. Эритроцитарные, гранулоцитарные и моноцитарные коммитированные клетки-предшественники либо слабо экспрессируют антиген CD34, либо он на их поверхности вообще отсутствует (фенотип CD34 ). На поверхностной мембране дифференцированных клеток костного мозга и зрелых форменных элементов крови антиген CD34 не выявляется.

гемопоэтические стволовые клетки

Надо заметить, что в динамике дифференцировки кроветворных клеток-предшественников не только снижается уровень экспрессии CD34, но и параллельно прогрессивно повышается экспрессия антигена CD38 — интегрального мембранного гликопротеида с молекулярной массой 46 кДа, обладающего NAD-гликогидролазной и ADP-рибозилциклазной активностью, что предполагает его участие в транспорте и синтезе ADP-рибозы (Sutherlanf et al, 1990). Таким образом, появляется возможность двойного контроля степени коммитирования кроветворных клеток-предшественников.

Популяция клеток с фенотипом CD34+CD38+, составляющая от 90 до 99% СD34-позитивных клеток костного мозга, содержит клетки-предшественники с ограниченным пролиферативным и дифференцировочным потенциалом, тогда как клетки с фенотипом CD34+CD38 могут претендовать на роль ГСК.

Действительно, популяция клеток костного мозга, описываемая формулой CD34+CD38~, содержит относительно большое количество примитивных стволовых клеток, способных дифференцироваться в миелоидном и лимфоидном направлениях. В условиях длительного культивирования клеток с фенотипом CD34+CD38" удается получить все зрелые форменные элементы крови: нейтрофилы, эозинофилы, базофилы, моноциты, мегакариоциты, эритроциты и лимфоциты (Huangs, Terstappen, 1992).

Относительно недавно установлено, что СD34-позитивные клетки экспрессируют еще два маркера — АС133 и CD90 (Thy-1), которые также используются для идентификации ГСК. Антиген Thy-1 коэкспрессируется с рецептором CD117 (c-kit) на СБ34+-клетках костного мозга, пуповинной и периферической крови. Это поверхностный фосфатидилинозитолсвязывающий гликопротеин с молекулярной массой 25-35 кДа, принимающий участие в процессах клеточной адгезии (DArena et al., 1998).

Некоторые авторы считают, что антиген Thy-1 является маркером наиболее незрелых СD34-позитивных клеток (Audet et al., 1998). Самовоспроизводящиеся клетки с фенотипом CD34+Thy-1+ дают начало длительно культивируемым линиям с образованием дочерних клеток. Предполагается, что антиген Thy-1 блокирует регуляторные сигналы, вызывающие остановку клеточного деления (DArena et al., 1998). Несмотря на то что СD34+Тhу1+-клетки способны к самовоспроизводству и созданию длительно культивируемых линий, их фенотип никак не может относиться исключительно к ГСК, поскольку содержание Тhу-1+ в общей массе СБ34-позитивных клеточных элементов составляет около 50%, что значительно превышает количество гемопоэтических клеток (Bouscary et al., 2000).

- Читать далее "Фенотип гемопоэтических стволовых клеток. Источники гемопоэтических стволовых клеток"

Оглавление темы "Гемопоэтические стволовые клетки":
1. Ценность гемопоэтических стволовых клеток. Производные гемопоэза стволовой клетки
2. Сопутствующие клетки. Характеристика гемопоэтических стволовых клеток
3. Выделение гемопоэтических стволовых клеток. Маркеры гемопоэтических стволовых клеток
4. Фенотип гемопоэтических стволовых клеток. Источники гемопоэтических стволовых клеток
5. Различия гемопоэтических стволовых клеток. Первичный гемопоэз
6. Гемопоэтические стволовые клетки пуповинной крови. Пуповинная кровь
7. Стволовые клетки кордовой крови. Примитивные гемопоэтические клетки пуповинной крови
8. Получение стволовых клеток из кордовой крови. Получение пуповинной крови
9. Правила получения пуповинной крови. Применение пуповинной крови
10. Активность гемопоэтических клеток пуповинной крови. Жизнеспособность клеток кордовой клетки

Ждем ваших вопросов и рекомендаций: