Поиск возможностей более качественного выделения гемопоэтических стволовых клеток продолжается. Однако стволовые кроветворные клетки морфологически подобны лимфоцитам и представляют собой относительно однородную совокупность клеток с почти круглыми ядрами, мелкодисперсным хроматином и небольшим количеством слабобазофильной цитоплазмы (Андреева и др., 1999; Woods et al., 2001). Точное их количество определить тоже сложно. Допускается, что ГСК в костном мозге человека встречаются с частотой 1 на 106 ядросодержащих клеток.

Для улучшения качества идентификации гемопоэтических стволовых клеток проводится последовательное или одновременное (на многоканальном сортере) исследование спектра мембранносвязанных антигенов, причем в ГСК фенотип CD34+CD38 должен сочетаться с отсутствием маркеров линейной дифференцировки, особенно антигенов иммунокомпетентных клеток, таких как CD4, поверхностные иммуноглобулины и гликофорин (Чертков, Дризе, 1998).

Практически все схемы фенотипирования гемопоэтических стволовых клеток включают определение антигена CD34. Этот гликопротеид с молекулярной массой около 110 кДа, несущий несколько сайтов гликозилирования, экспрессируется на плазматической клеточной мембране после активации соответствующего гена, локализованного на 1-й хромосоме. Функция молекулы CD34 связана с L-селектинопосредованным взаимодействием ранних клеток-предшественников кроветворения со стромальной основой костного мозга. Однако следует помнить, что наличие антигена CD34 на поверхности клетки позволяет произвести только предварительную оценку содержания ГСК в клеточной суспензии, поскольку он экспрессируется и другими клетками-предшественниками гемопоэза, а также стромальными клетками костного мозга (Simmons, Torok-Strob, 1991) и эндотелиальными клетками (Shamblott et al., 2001).

В процессе дифференцировки гемопоэтических клеток-предшественников экспрессия CD34 перманентно снижается. Эритроцитарные, гранулоцитарные и моноцитарные коммитированные клетки-предшественники либо слабо экспрессируют антиген CD34, либо он на их поверхности вообще отсутствует (фенотип CD34 ). На поверхностной мембране дифференцированных клеток костного мозга и зрелых форменных элементов крови антиген CD34 не выявляется.

Надо заметить, что в динамике дифференцировки кроветворных клеток-предшественников не только снижается уровень экспрессии CD34, но и параллельно прогрессивно повышается экспрессия антигена CD38 — интегрального мембранного гликопротеида с молекулярной массой 46 кДа, обладающего NAD-гликогидролазной и ADP-рибозилциклазной активностью, что предполагает его участие в транспорте и синтезе ADP-рибозы (Sutherlanf et al, 1990). Таким образом, появляется возможность двойного контроля степени коммитирования кроветворных клеток-предшественников.

Популяция клеток с фенотипом CD34+CD38+, составляющая от 90 до 99% СD34-позитивных клеток костного мозга, содержит клетки-предшественники с ограниченным пролиферативным и дифференцировочным потенциалом, тогда как клетки с фенотипом CD34+CD38 могут претендовать на роль ГСК.

Действительно, популяция клеток костного мозга, описываемая формулой CD34+CD38~, содержит относительно большое количество примитивных стволовых клеток, способных дифференцироваться в миелоидном и лимфоидном направлениях. В условиях длительного культивирования клеток с фенотипом CD34+CD38" удается получить все зрелые форменные элементы крови: нейтрофилы, эозинофилы, базофилы, моноциты, мегакариоциты, эритроциты и лимфоциты (Huangs, Terstappen, 1992).

Относительно недавно установлено, что СD34-позитивные клетки экспрессируют еще два маркера — АС133 и CD90 (Thy-1), которые также используются для идентификации ГСК. Антиген Thy-1 коэкспрессируется с рецептором CD117 (c-kit) на СБ34+-клетках костного мозга, пуповинной и периферической крови. Это поверхностный фосфатидилинозитолсвязывающий гликопротеин с молекулярной массой 25-35 кДа, принимающий участие в процессах клеточной адгезии (DArena et al., 1998).

Некоторые авторы считают, что антиген Thy-1 является маркером наиболее незрелых СD34-позитивных клеток (Audet et al., 1998). Самовоспроизводящиеся клетки с фенотипом CD34+Thy-1+ дают начало длительно культивируемым линиям с образованием дочерних клеток. Предполагается, что антиген Thy-1 блокирует регуляторные сигналы, вызывающие остановку клеточного деления (DArena et al., 1998). Несмотря на то что СD34+Тhу1+-клетки способны к самовоспроизводству и созданию длительно культивируемых линий, их фенотип никак не может относиться исключительно к ГСК, поскольку содержание Тhу-1+ в общей массе СБ34-позитивных клеточных элементов составляет около 50%, что значительно превышает количество гемопоэтических клеток (Bouscary et al., 2000).

- Читать далее "Фенотип гемопоэтических стволовых клеток. Источники гемопоэтических стволовых клеток"