Сопутствующие клетки. Характеристика гемопоэтических стволовых клеток

Кроме производных гемопоэза любой исходный материал для выделения гемопоэтических стволовых клеток содержит значительное количество сопутствующих клеток. В связи с этим необходима предварительная очистка трансплантата, в первую очередь, от активных клеток иммунной системы донора. Обычно для этого применяют иммуноселекцию, основанную на экспрессии лимфоцитами специфических антигенов, что дает возможность их выделять и удалять с помощью моноклональных антител (Волкова, 2001).

Кроме того, разработана иммунорозеточная методика Т-лимфоцитарного истощения трансплантата костного мозга, которая базируется на образовании комплексов СD4+-лимфоцитов и специфических моноклональных антител, эффективно удаляемых при помощи афереза. Данная методика обеспечивает получение очищенного клеточного материала с 40-60% содержанием ГСК (Cortenobach etal., 1999).

Увеличение числа клеток-предшественников за счет удаления зрелых форменных элементов крови из продукта лейкафереза достигается путем противоточного центрифугирования с последующей фильтрацией (в присутствии хелатора — тринатрия цитрата) через колонки, содержащие нейлоновые волокна, покрытые иммуноглобулином человека. Последовательное применение этих двух методик обеспечивает полное очищение трансплантата от тромбоцитов, на 89% — от эритроцитов и на 91% — от лейкоцитов.

Благодаря значительному снижению потерь гемопоэтических стволовых клеток уровень СБ34+-клеток в общей клеточной массе удается повысить до 50% (Kwekkboom et al., 1998).

стволовые клетки

Для функциональной характеристики выделенных гемопоэтических стволовых клеток используют их способность создавать колонии зрелых форменных элементов крови в культуре. Анализ сформированных колоний позволяет идентифицировать и количественно оценить типы клеток-предшественников, степень их коммитирования, а также установить направление их дифференцировки.

Клоногенная активность определяется в полутвердых средах на метилцеллюлозе, агаре, плазменном или фибриновом геле, снижающих миграционную активность клеток, что предотвращает их прикрепление к поверхности стекла или пластика. В оптимальных условиях культивирования клоны из одиночной клетки развиваются за 7-18 дней. При наличии в клоне менее 50 клеток он идентифицируется как одиночный кластер, если число клеток превышает 50 — как колония.

Учитывается количество клеток, способных образовать колонию (колониеобразую-щие единицы — КОЕ или колониеобразующие клетки — КОК). Следует заметить, что параметры КОЕ и КОК не соответствуют количеству ГСК в клеточной суспензии, хотя и коррелирует с ним (Петренко, Грищенко, 2003), что еще раз подчеркивает необходимость определения функциональной (колониеобразующей) активности ГСК in vitro.

Среди клеток костного мозга ГСК обладают наиболее высоким пролиферативным потенциалом, за счет чего формируют в культуре самые большие по размеру колонии. По числу таких колоний предлагается косвенно определять количество стволовых клеток. После образования in vitro колоний, превышающих в диаметре 0,5 мм и с численностью клеток более 1000, авторы провели тестирование таких клеток на устойчивость к сублетальным дозам 5-фторурацила и изучили их способность к репопуляции костного мозга смертельно облученных животных.

По указанным параметрам выделенные клетки почти не отличались от гемопоэтических стволовых клеток и получили аббревиатурный символ HPP-CFC — колоннеобразующие клетки с высоким пролиферативным потенциалом (Bertoncello et al., 1991; Holyoake, 1993).

- Читать далее "Выделение гемопоэтических стволовых клеток. Маркеры гемопоэтических стволовых клеток"

Оглавление темы "Гемопоэтические стволовые клетки":
1. Ценность гемопоэтических стволовых клеток. Производные гемопоэза стволовой клетки
2. Сопутствующие клетки. Характеристика гемопоэтических стволовых клеток
3. Выделение гемопоэтических стволовых клеток. Маркеры гемопоэтических стволовых клеток
4. Фенотип гемопоэтических стволовых клеток. Источники гемопоэтических стволовых клеток
5. Различия гемопоэтических стволовых клеток. Первичный гемопоэз
6. Гемопоэтические стволовые клетки пуповинной крови. Пуповинная кровь
7. Стволовые клетки кордовой крови. Примитивные гемопоэтические клетки пуповинной крови
8. Получение стволовых клеток из кордовой крови. Получение пуповинной крови
9. Правила получения пуповинной крови. Применение пуповинной крови
10. Активность гемопоэтических клеток пуповинной крови. Жизнеспособность клеток кордовой клетки

Ждем ваших вопросов и рекомендаций: