Аутологичные фибробласты применяют и в такой сложнейшей области пластической хирургии, как восстановительная коррекция повреждений голосовых связок. Обычно с этой целью используется бычий коллаген (Ford et al., 1984), длительность действия которого ограничена его иммуногенностью. Являясь чужеродным белком, бычий коллаген чувствителен к коллагеназе реципиента и может вызывать иммунные реакции, для снижения риска которых были разработаны технологии получения препаратов коллагена, перекрестно связанного с глутаральдегидом.

Их преимущество заключается в большей стабильности и меньшей иммуногенности (Ford, 1986), что нашло практическое применение в устранении дефектов и атрофии голосовых связок (Ford, 1992; Marbaix et al., 1992). Инъекции аутологичного коллагена впервые были использованы в 1995 году (Ford et al., 1995). Методика обеспечивала сохранение первичной структуры волокон аутологичного коллагена, включая внутримолекулярные энзиматически катализированные перекрестные связи.

Дело в том, что натуральные коллагеновые волокна более устойчивы к разрушению протеазами, чем реконституированный коллаген, в котором телопептиды разрезаны. Целостность телопептидов важна для четвертичного строения коллагеновых волокон и образования перекрестных связей между смежными молекулами коллагена. В отличие от препаратов бычьего коллагена, аутологичный коллаген не вызывает у реципиента иммунных реакций, однако он недостаточно эффективен в качестве восполняющего агента. Стойкая коррекция может быть достигнута за счет локальной продукции коллагена путем трансплантации аутологичных фибробластов.

Однако при исследовании эффективности пересадки аутологичных фибробластов в клинике выявились определенные затруднения. В раннем периоде после трансплантации фибробластов клинический эффект оказался слабее по сравнению с таковым после введения бычьего коллагена. При культивировании аутологичных фибробластов не исключена возможность трансформации нормальных фибробластов в патологические, так называемые миофибробласты, ответственные за развитие фиброза и образование рубцов (Dorby, 1990; Eddy et al, 1998), о чем свидетельствует сокращение коллагенового геля, обусловленное специфическим взаимодействием фибробластов и коллагеновых фибрилл (Guidry et al., 1985, 1986).
Кроме того, после серийного пассирования in vitro фибробласты теряют способность синтезировать белки внеклеточного матрикса (Fredland, 1995). et al..

Тем не менее, в настоящее время экспериментально отработана методика культивирования аутологичных фибробластов человека, устраняющая указанные выше недостатки и не приводящая к онкогенной трансформации нормальных фибробластов (Берк и др., 2000). Полученные по такой методике аутологичные фибробласты используются для восполнения дефектов мягких тканей лица. В исследовании Г. Келлер и соавторов (2000) лечение получали 20 пациентов в возрасте от 37 лет до 61 года с морщинами и атрофическими рубцами.

Биоптаты кожи (4 мм) заушной области транспортировали в лабораторию в стерильных пробирках, содержащих 10 мл культуральной среды (среда Игла с антибиотиком, микосептиком, пируватом и эмбриональной телячьей сывороткой). Материал помещали внутрь 3-5 культуральных чашек диаметром 60 мм и инкубировали в термостате с атмосферой, содержащей 5% С02. Через 1 неделю клетки снимали с чашек путем трипсинизации и помещали во флаконы площадью 25 см2. Клетки вводили пациентам в количестве 4 х 107. По данным проточной цитометрии, культивированные фибробласты продуцировали большое количество коллагена I типа.

В исследованиях in vitro показана нормальная сократительная способность инъецируемых фибробластов. Через 2 месяца после подкожного введения культивированных фибробластов в дозе 4 х 107 клеток у мышей nude опухолей выявлено не было. Инъецируемые фибробласты не вызывали у пациентов образования рубцов и диффузного фиброза. По мнению автора, приживленные аутологичные фибробласты способны постоянно продуцировать коллаген, что даст косметический эффект омоложения. При этом, поскольку сроки жизни дифференцированных клеток ограничены, фибробласты, взятые у молодого пациента, более эффективны, чем полученные у пожилых людей.

В перспективе предполагается возможность криоконсервации культуры фибробластов, взятых у молодого донора, чтобы позже трансплантировать пожилому пациенту его собственные молодые клетки. В заключение следует не вполне корректный вывод о том, что аутологичные фибробласты при условии их функциональной сохранности являются идеальным средством коррекции дефектов мягких тканей лица. При этом сам же автор отмечает, что в процессе исследования возникли и некоторые проблемные ситуации, связанные с применением аутологичной фибробласт-коллагеновой системы. Клинический эффект часто оказывался слабее, чем при использовании бычьего коллагена, что вызывало разочарование пациентов (Келлер и др., 2000).

- Читать далее "Применение мезенхимальных стволовых клеток. Модификация мезенхимальных стволовых клеток"