Аутологичные фибробласты в пластической хирургии. Культивирование аутологичных фибробластов

Аутологичные фибробласты применяют и в такой сложнейшей области пластической хирургии, как восстановительная коррекция повреждений голосовых связок. Обычно с этой целью используется бычий коллаген (Ford et al., 1984), длительность действия которого ограничена его иммуногенностью. Являясь чужеродным белком, бычий коллаген чувствителен к коллагеназе реципиента и может вызывать иммунные реакции, для снижения риска которых были разработаны технологии получения препаратов коллагена, перекрестно связанного с глутаральдегидом.

Их преимущество заключается в большей стабильности и меньшей иммуногенности (Ford, 1986), что нашло практическое применение в устранении дефектов и атрофии голосовых связок (Ford, 1992; Marbaix et al., 1992). Инъекции аутологичного коллагена впервые были использованы в 1995 году (Ford et al., 1995). Методика обеспечивала сохранение первичной структуры волокон аутологичного коллагена, включая внутримолекулярные энзиматически катализированные перекрестные связи.

Дело в том, что натуральные коллагеновые волокна более устойчивы к разрушению протеазами, чем реконституированный коллаген, в котором телопептиды разрезаны. Целостность телопептидов важна для четвертичного строения коллагеновых волокон и образования перекрестных связей между смежными молекулами коллагена. В отличие от препаратов бычьего коллагена, аутологичный коллаген не вызывает у реципиента иммунных реакций, однако он недостаточно эффективен в качестве восполняющего агента. Стойкая коррекция может быть достигнута за счет локальной продукции коллагена путем трансплантации аутологичных фибробластов.

Однако при исследовании эффективности пересадки аутологичных фибробластов в клинике выявились определенные затруднения. В раннем периоде после трансплантации фибробластов клинический эффект оказался слабее по сравнению с таковым после введения бычьего коллагена. При культивировании аутологичных фибробластов не исключена возможность трансформации нормальных фибробластов в патологические, так называемые миофибробласты, ответственные за развитие фиброза и образование рубцов (Dorby, 1990; Eddy et al, 1998), о чем свидетельствует сокращение коллагенового геля, обусловленное специфическим взаимодействием фибробластов и коллагеновых фибрилл (Guidry et al., 1985, 1986).
Кроме того, после серийного пассирования in vitro фибробласты теряют способность синтезировать белки внеклеточного матрикса (Fredland, 1995). et al..

фибробласты пластической хирургии

Тем не менее, в настоящее время экспериментально отработана методика культивирования аутологичных фибробластов человека, устраняющая указанные выше недостатки и не приводящая к онкогенной трансформации нормальных фибробластов (Берк и др., 2000). Полученные по такой методике аутологичные фибробласты используются для восполнения дефектов мягких тканей лица. В исследовании Г. Келлер и соавторов (2000) лечение получали 20 пациентов в возрасте от 37 лет до 61 года с морщинами и атрофическими рубцами.

Биоптаты кожи (4 мм) заушной области транспортировали в лабораторию в стерильных пробирках, содержащих 10 мл культуральной среды (среда Игла с антибиотиком, микосептиком, пируватом и эмбриональной телячьей сывороткой). Материал помещали внутрь 3-5 культуральных чашек диаметром 60 мм и инкубировали в термостате с атмосферой, содержащей 5% С02. Через 1 неделю клетки снимали с чашек путем трипсинизации и помещали во флаконы площадью 25 см2. Клетки вводили пациентам в количестве 4 х 107. По данным проточной цитометрии, культивированные фибробласты продуцировали большое количество коллагена I типа.

В исследованиях in vitro показана нормальная сократительная способность инъецируемых фибробластов. Через 2 месяца после подкожного введения культивированных фибробластов в дозе 4 х 107 клеток у мышей nude опухолей выявлено не было. Инъецируемые фибробласты не вызывали у пациентов образования рубцов и диффузного фиброза. По мнению автора, приживленные аутологичные фибробласты способны постоянно продуцировать коллаген, что даст косметический эффект омоложения. При этом, поскольку сроки жизни дифференцированных клеток ограничены, фибробласты, взятые у молодого пациента, более эффективны, чем полученные у пожилых людей.

В перспективе предполагается возможность криоконсервации культуры фибробластов, взятых у молодого донора, чтобы позже трансплантировать пожилому пациенту его собственные молодые клетки. В заключение следует не вполне корректный вывод о том, что аутологичные фибробласты при условии их функциональной сохранности являются идеальным средством коррекции дефектов мягких тканей лица. При этом сам же автор отмечает, что в процессе исследования возникли и некоторые проблемные ситуации, связанные с применением аутологичной фибробласт-коллагеновой системы. Клинический эффект часто оказывался слабее, чем при использовании бычьего коллагена, что вызывало разочарование пациентов (Келлер и др., 2000).

- Читать далее "Применение мезенхимальных стволовых клеток. Модификация мезенхимальных стволовых клеток"

Оглавление темы "Стволовые клетки костного мозга":
1. Стволовые клетки при глубоких ожогах. Задачи лечения ожогов
2. Культивированные кератиноциты. Перициты в лечении ран
3. Аутологичные фибробласты в пластической хирургии. Культивирование аутологичных фибробластов
4. Применение мезенхимальных стволовых клеток. Модификация мезенхимальных стволовых клеток
5. Мезенхимальные стволовые клетки в онкологии. Трансплантация мезенхимальных стволовых клеток
6. Культивирование стволовых клеток костного мозга. Эктопическая трансплантация стволовых клеток костного мозга
7. Идентефикация мезенхимальных стволовых клеток. Эмбриогенез примитивной стромы костного мозга
8. Трансформация ретикулярных клеток в адипоциты. Формирование сосудов de novo
9. Ангиогенез в кости. Клетки костного мозга
10. Стромальные стволовые клетки костного мозга. Онтогенез соединительной ткани костного мозга

Ждем ваших вопросов и рекомендаций: