29 клональных штаммов второго-третьего пассажей, полученных из первичных культур костного мозга кролика, помещались в диффузионные камеры и имплантировались внутрибрюшинно гомологичным животным. Проведенные исследования показали, что 45% костномозговых моноклональных штаммов обладают остеогенными потенциями. Исключительно ретикулярную ткань содержали 9 камер, но вместе с костной и хрящевой тканью она присутствовала еще в 13 камерах, что составляло 76% всех штаммов.

В камерах типа О, где была возможна дифференцировка как костной, так и хрящевой ткани, исследованы 16 штаммов. В четырех камерах (25%) формировалась как костная, так и хрящевая ткань. Следует еще раз отметить, что в исследованиях Р. Чайлахяна и соавторов (2001) отдельные клетки-предшественники претерпевали в составе клеточного штамма от 31 до 34 удвоений, а их потомство составило 0,9-2,0 х 109 клеток.

Количество митозов, которым подвергались клетки-предшественники поликлональных штаммов, практически не отличалось от такового у клеток моноклональных штаммов. При этом темп развития поликлональных штаммов, особенно в первой фазе их формирования, в существенной мере зависел от количества колоний, используемых для инициации штаммов. Диплоидные штаммы эмбриональных фибробластов человека (WI-38) при реклонировании на 12-15-м уровнях удвоения также формировали колонии, различающиеся по диаметру и содержанию в них клеток.

Крупные колонии, содержащие более 103 клеток, составляли всего 5-10%. С увеличением количества делений процент крупных колоний снижался. Моно- и поликлональные штаммы стромальных костномозговых фибробластов сохраняли диплоидный набор хромосом после 20 и более удвоений, а тенденция их развития была сопоставима с динамикой развития диплоидных штаммов эмбриональных фибробластов. Анализ дифференцировочного потенциала отдельных костномозговых стромальных клеток-предшественников, проведенный путем трансплантации моноклональных штаммов в диффузионные камеры, показал, что половина из них остеогенные.

Крупные колонии составили 10% от их общего числа. Следовательно, число остеогенных колоние-образующих клеток соответствовало примерно 5% от их общей популяции. В общей массе выявленных авторами остеогенных клеток-предшественников присутствовали клетки, способные формировать одновременно костную и хрящевую ткань. При этом впервые установлено, что для этих двух типов ткани во взрослом организме есть общая клетка-предшественник: 25% тестируемых клонов были созданы подобными клетками, а их численность среди общей популяции клеток-предшественников составляла не менее 2,5%.

Таким образом, гетеротопная трансплантация отдельных клонов костномозговых фибробластов открыла новые аспекты структурной организации популяции мезенхимальных клеток-предшественников. Обнаружены стромальные клетки-предшественники, способные переносить специфическое микроокружение сразу для всех ростков кроветворения, численность которых среди исследованных крупных клонов на разных моделях составляет от 5 до 15% (0,5-1,5% от общего числа выявляемых клеток-предшественников).

Наряду с клонами, переносящими полное костномозговое микроокружение, присутствуют клетки-предшественники, детерминированные лишь к остеогенезу, образующие при переносе в открытой системе костную ткань, не поддерживающую развитие гемопоэза. Их численность от общего числа клеток-предшественников составляет 1,5-3%. Часть этих клеток способна формировать костную ткань с ограниченным сроком самоподдержания. Следовательно, популяция стромальных клеток-предшественников по своему дифференцировочному потенциалу является гетерогенной.

Среди них имеется категория клеток, претендующих на роль стволовых стромальных клеток, способных дифференцироваться во всех трех направлениях, свойственных стромальной ткани костного мозга, образуя при этом костную, хрящевую и ретикулярную ткань. Приведенные данные позволяют надеяться, что с помощью различных клеточных маркеров удастся определить вклад каждого типа стромальных клеток в организацию специфического микроокружения и поддержку кроветворения в декстеровских культурах.

- Читать далее "Агранулярные клетки костного мозга. Размножение стромальных клеток-предшественников"