Клетки желточного мешка переводят в гемопоэтические линии путем добавления в среду культивирования IL-3 и супернатанта фидера от стромаль-ных клеток. Полагают, что фидер продуцирует целый комплекс сигналов для созревания линий кроветворных клеток: IL-3, SCF, FGF, IGF1, IL-6, G-CSF (Palacious, 1995).

Трансфекция в геном ЭСК гена hox-b4 значительно повышает скорость образования предшественников миелоидного и эритроидного ряда in vitro. Трансфицированные геноhox-b4 ЭСК обладают 50-кратно усиленным потенциалом кроветворения за счет резкого увеличения численности ранних прогениторных популяций гемопоэтических стволовых клеток.

Кроме того, трансплантация таких искусственно созданных кроветворных клонов с измененной пропорцией стволовых/прогениторных клеток оказалась значительно более эффективной в плане колонизации, приживления в костном мозге реципиента и выработки форменных элементов крови (Hegalson, 1996; Robey, 2000).

Порядок экспрессии генов и белков в ходе образования из ЭСК кардиомиоцитов также напоминает последовательность этих процессов in vivo. При дифференцировке кардиомиоцитов из ЭСК первые сокращения групп клеток отмечены через 1-2 суток после прикрепления эмбриоидных телец к субстрату, а максимальное их число — через 5-7 суток (Wobus et aL, 1991; Guan et aL, 1999).

Первыми в ходе кардиогенеза экспрессируются гены специфических транскрипционных факторов Nkx 2,5. В клетках линии D3 это происходит на 3-й сутки (Wobus, Guan, 1998). Однако на еще более ранних этапах (за двое суток до начала сокращений кардиомиоцитов) наблюдается экспрессия гена, кодирующего субъединицу белка кальциевого канала. Затем следует экспрессия генов а и Р тяжелых цепей миозина сердца, а на более поздних стадиях дифференцировки активируются ген легких цепей миозина 2v (mlc-2v) и ген атриального натрийуретического фактора.

Последовательность экспрессии белков в ходе кардиогенеза выглядит следующим образом. Первыми экспрессируются тинин (специфический белок Z-линии), а-актинин и миомезин, затем саркомерные тяжелые цепи миозина и а-актина, а еще позднее — М-белок (Wobus, Guan, 1998).

Сейчас разработаны более эффективные методы получения кардиомиоцитов под контролем экспрессии гена crypto. Продуктом этого гена является фактор транскрипции, контролирующий первый этап генетической детерминации кардиомиоцитов. Имплантация в бластоцисту клеток линии ЭСК с двойным нокаутом (crypto) приводит у химерных зародышей к потере способности генерировать зачаток сердца и кардиомиоциты.

Установлено, что накопление кислородных радикалов и электростимуляция ЭСК в культуре способствуют образованию зрелых сокращающихся кардиомиоцитов с завершенной структурой саркомеров. Полученные таким методом кардиомиоциты хорошо встраиваются в миокард развивающихся зародышей или в постишемическую некробрютическую ткань сердца (Репин, 2001).

- Читать далее "Миогенная дифференцировка стволовых клеток. Факторы дифференцировки стволовых клеток"