Получение фагов. Практическое использование фагов

Низкая эффективность фаготерапии и фагопрофилактики компенсируется широким использованием фагов для идентификации и внутривидовой дифференциации бактерий, при диагностике инфекционных болезней и эпидемиологическом обследовании очагов дизентерии, сальмонеллезов, дифтерии, стафилококковых и других инфекций, где с их помощью удается выявить источники и пути передачи заразного начала. В качестве иллюстрации приведем способы выявления фагов и определения их активности, методики индукции лизогенных бактерий и фаготипирования.

Выделение вирулентного фага. Для выделения фага исследуемый жидкий материал центрифугируют. Надосадочную жидкость в количестве 1 мл переносят в 30 мл мясо-пептон но го бульона (МПБ), засеянного 1 мл 6-18-часовой культуры соответствующего микроорганизма.

Посев помещают в термостат при температуре 37 °С на сутки, после чего пропускают через фильтр Зейтца, фильтрат разводят 1:10, 1:100, 1:1000 и прибавляют по 0,05 мл культуры. Контрольной служит бульонная культура без фильтрата. Через 18-20 ч пробирки извлекают из термостата. О наличии фага судят по просветлению среды (в контрольной отмечается нормальный рост бактерий).

получение фагов

Индукция лизогенных бактерий ультрафиолетовыми лучами. Свежевыросшую 8-часовую культуру бактерий разводят 1:20-1:30 вероналовым буфером и по 5 мл разливают в две чашки Петри. Одну из них (опытную) открывают и в течение 30-180 с облучают под бактерицидной лампой БУВ, а вторую (контрольную) - выдерживают в зоне действия УФ-лучей закрытой. Затем обе взвеси бактерий (3-3,5 мл) засевают в две пробирки с 5 мл соответствующей питательной среды и после нескольких часов инкубации в термостате в облученном посеве обнаруживают литический эффект действия вегетативных фагов.

Типирование стафилококков набором 23 эталонных фаговаров. Суточную культуру золотистого стафилококка 209 Р высевают в 2,5 мл бульона Хоттингера, выращивают в течение 3-4 ч и засевают газоном на свежеприготовленную и подсушенную чашку Петри с 1,2%-м агаром. Дно засеянной чашки Петри делят карандашом на 23 квадрата и в каждый из них стандартной петлей или пастеровской пипеткой наносят каплю соответствующего фага. Результаты действия фага учитывают по степени лизиса культуры стафилококка, обозначая плюсами - от «±» до Определение активности фага по методу Аппельмана.

Активность фага определяют в МПБ. Для этого берут ряд пробирок, содержащих по 4,5 мл бульона. В первую пробирку вносят 0,5 мл испытуемого фага, смешивают его со средой и другой пипеткой переносят 0,5 мл в следующую пробирку и т. д. Таким образом фаг последовательно разводят от 10-1 до 10-9 и выше.

В каждое разведение фага вносят по 0,05 мл 18-часовой бульонной культуры соответствующего вида бактерий. Две пробирки с МПБ должны составлять контроль: одну засевают культурой бактерий (контроль за наличием в ней фага), во вторую наливают фаг (контроль его стерильности). Учет результатов проводят после 18-24 ч пребывания пробирок в термостате. Титр фага определяют наибольшим разведением, в котором наблюдается полный лизис бактерий.

- Читать далее "Выявление и подсчет фагов. Фитопатогенные вирусы"

Оглавление темы "Вирусные инфекции":
1. Получение фагов. Практическое использование фагов
2. Выявление и подсчет фагов. Фитопатогенные вирусы
3. Особенности сборки вирионов растений. Цитопатогенное действие вирусов
4. Вирусы насекомых. Палиэдроз
5. Гранулезы. Болезни насекомых без внутриклеточных включений
6. Арбовирусы. Насекомые-переносчики фитопатогенных вирусов
7. Вирусы, переносимые тлями. Распространение фитопатогенных вирусов
8. Вирусная инфекция. Восприимчивость и распространение вирусных инфекций
9. Эпидемический процесс вирусных инфекций. Классификация вирусных инфекций
10. Научная классификация вирусов. Противовирусный иммунитет

Ждем ваших вопросов и рекомендаций: